DGLA合成表達(dá)載體的構(gòu)建與棉花轉(zhuǎn)化的研究.pdf

1、多不飽和脂肪酸（Polyunsaturated fatty acid，PUFAs）是指含有兩個(gè)或兩個(gè)以上雙鍵且碳鏈長(zhǎng)度為18-22個(gè)碳原子的直鏈脂肪酸。多不飽和脂肪酸在人體的營(yíng)養(yǎng)與健康方面有著重要的作用。多不飽和脂肪酸主要的來(lái)源是深海魚類，但由于海洋魚類過(guò)度捕撈以及海洋污染等原因，導(dǎo)致魚油的產(chǎn)量和質(zhì)量無(wú)法滿足人類的需求(Domergue et al，2005；Drexler et al，2003)，所以需要尋找一條安全又經(jīng)濟(jì)的方法解決這

2、一問(wèn)題。近年來(lái)，隨著多不飽和脂肪酸代謝途徑以及合成途徑中相關(guān)酶克隆的研究，利用轉(zhuǎn)基因的方式，將與多不飽和脂肪酸合成相關(guān)酶基因轉(zhuǎn)入高等植物中來(lái)獲得多不飽和脂肪酸稱為研究熱點(diǎn)。棉花不僅是重要的經(jīng)濟(jì)作物，而且還是重要的油料作物，其棉籽油中亞油酸含量約49.5％-57.3%（董佳等，2010），可以作為合成多不飽和脂肪酸的重要基礎(chǔ)。
　　本試驗(yàn)通串聯(lián)表達(dá)盒的方法，構(gòu)建含有DGLA合成有關(guān)的去飽和酶和鏈延長(zhǎng)酶基因的表達(dá)載體，并轉(zhuǎn)化邯無(wú)198

3、和山農(nóng)棉9號(hào)兩個(gè)棉花品種來(lái)獲得轉(zhuǎn)基因植株，并對(duì)轉(zhuǎn)基因陽(yáng)性株進(jìn)行相關(guān)脂肪酸含量的測(cè)定。主要結(jié)果如下：
　　1.將輔助載體PAUX中的35S啟動(dòng)子替換為棉花種子特異性α球蛋白啟動(dòng)子，構(gòu)建成為含有種子特異性啟動(dòng)子的輔助載體PAUX(α)。
　　2.在輔助載體PAUX(α)的基礎(chǔ)上，利用多基因表達(dá)盒串聯(lián)的方法，構(gòu)建成含有從LA到EDA再到DGLA合成相關(guān)酶基因的多基因表達(dá)載體pCamBAR-(α-△9Elo)-(α-△8Des)。<

4、br>　　3.利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的噴花法及子房注射法，將表達(dá)載體pCamBAR-(α-△9Elo)-(α-△8Des)分別導(dǎo)入山農(nóng)棉9號(hào)和邯無(wú)198。經(jīng)過(guò)抗除草劑鑒定和α球蛋白啟動(dòng)子、△8Des、△9Elo、BAR等目的基因PCR鑒定，篩選出18株陽(yáng)性植株。
　　4.對(duì)陽(yáng)性植株的棉花種子進(jìn)行脂肪酸鑒定，結(jié)果表明，在四個(gè)樣品的轉(zhuǎn)基因棉花種子中檢測(cè)到油酸（OA）、亞油酸（LA）、γ-亞麻酸（EDA）、雙高-γ-亞麻酸（DGLA），在對(duì)照中