丹參CPS基因表達(dá)載體構(gòu)建及其對(duì)丹參遺傳轉(zhuǎn)化的研究.pdf_第1頁(yè)
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1、丹參(Salvia miltiorrhuza Bunge)為我國(guó)傳統(tǒng)名貴中藥材,具有活血化瘀,通經(jīng)止痛的功效。丹參中主要含有脂溶性二萜類(lèi)化合物和水溶性化合物,其中以丹參酮ⅡA為代表的二萜類(lèi)化合物是治療心腦血管系統(tǒng)疾病的重要藥物。本文應(yīng)用gateway克隆技術(shù)構(gòu)建丹參CPS基因的過(guò)表達(dá)載體并通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)法,通過(guò)發(fā)根農(nóng)桿菌得到丹參毛狀根,根癌農(nóng)桿菌得到丹參轉(zhuǎn)基因株系和煙草轉(zhuǎn)基因株系,為進(jìn)一步篩選高產(chǎn)株系打下基礎(chǔ),也為進(jìn)一步研究CPS基因的

2、功能提供了有利條件。 根據(jù)本實(shí)驗(yàn)室獲得的CPS基因cDNA和Gateway 克隆技術(shù)的要求,設(shè)計(jì)含有 attB 接頭的引物,將CPS基因兩端加上attB序列,通過(guò)BP反應(yīng)和LR反應(yīng)后獲得含有CPS基因的過(guò)表達(dá)載體。通過(guò)電擊轉(zhuǎn)化將構(gòu)建好的載體pH7WG2D-CPS轉(zhuǎn)入發(fā)根農(nóng)桿菌ACCC10060和根癌農(nóng)桿菌EH105。通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)法獲得丹參毛狀根、丹參轉(zhuǎn)基因株系和煙草轉(zhuǎn)基因株系。 本實(shí)驗(yàn)通過(guò)PCR、酶切、測(cè)序確定載體pH

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