棉花葉綠體Cu-Zn-SOD基因植物表達(dá)載體的構(gòu)建及轉(zhuǎn)化.pdf

1、本文論述了棉花葉綠體Cu/Zn-SOD基因植物表達(dá)載體的構(gòu)建及轉(zhuǎn)化，全文主要內(nèi)容如下： (1)棉花葉綠體Cu-ZnSOD基因植物表達(dá)載體的構(gòu)建：以質(zhì)粒PBll21作為植物遺傳轉(zhuǎn)化的載體，對(duì)所克隆的棉花葉綠體Cu-ZnSOD基因和PBI121作Bam HI/SacⅠ雙酶切，電泳回收目的基因片段和載體片段，再用連接酶將二者連接起來(lái)，并轉(zhuǎn)化到農(nóng)桿菌LBA4404感受態(tài)細(xì)胞中，即成為棉花葉綠體Cu-ZnSOD基因植物表達(dá)載體PBI-YS

2、OD。對(duì)所構(gòu)建的植物表達(dá)載體PBI-YSOD進(jìn)行相關(guān)的質(zhì)粒提取檢測(cè)和PCR檢測(cè)，結(jié)果顯示：植物表達(dá)載體PCR結(jié)果和目的基因大小相同，轉(zhuǎn)化質(zhì)粒和空質(zhì)粒相比，略有增大，表明目的基因片段已經(jīng)轉(zhuǎn)化到了農(nóng)桿菌中,可以對(duì)植物進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化。 (2)煙草遺傳轉(zhuǎn)化與轉(zhuǎn)化植株的檢測(cè)：利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將所構(gòu)建的植物表達(dá)載體導(dǎo)入NC89煙草，卡那霉素篩選得到23株陽(yáng)性植株，經(jīng)PCR、Southern blotting檢測(cè)結(jié)果顯示有四個(gè)煙草株系中整合了棉

3、花葉綠體Cu/Zn-SOD基因，SOD酶活性測(cè)定結(jié)果顯示四株轉(zhuǎn)基因煙草植株SOD酶活性都明顯高于非轉(zhuǎn)基因煙草，離體葉片暗處理試驗(yàn)結(jié)果也證明四株轉(zhuǎn)基因煙草比非轉(zhuǎn)基因煙草SOD酶活下降速度明顯減慢，百草枯噴施試驗(yàn)表明，轉(zhuǎn)基因煙草都比非轉(zhuǎn)基因煙草對(duì)百草枯的耐性增強(qiáng)，這一系列試驗(yàn)間接地說(shuō)明外源基因的導(dǎo)入增強(qiáng)了煙草的耐衰老能力。 (3)棉花的遺傳轉(zhuǎn)化：以中棉所24號(hào)和早熟早衰材料652583為材料，利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將所構(gòu)建的植物表達(dá)載體導(dǎo)