馬鈴薯Y、S病毒及花生條紋病毒外殼蛋白基因的克隆與表達(dá).pdf

1、1.對田間采集的馬鈴薯病葉進(jìn)行ELISA檢測,取結(jié)果呈陽性的樣品分別提取馬鈴薯γ病毒(PVY)及馬鈴薯S病毒(PVS)的總RNA,參照文獻(xiàn)報道的基因序列分別合成PVY和PVS的5'和3'引物,通過RT-PCR擴(kuò)增合成外殼蛋白的cDNA,并將其克隆至pGEM-T Easy載體上.經(jīng)限制酶譜鑒定后進(jìn)行全序列測定,結(jié)果表明:PVY-cp基因由801個核昔酸組成,編碼267個氨基酸,與文獻(xiàn)報道的3個PVY-cp基因相比同源性均在90﹪以上,且其

2、編碼的氨基酸同源性均在93.5﹪以上;PVS-cp基因由885個核昔酸組成,編碼294個氨基酸,與文獻(xiàn)報道的3個PVS-cp基因相比同源性均在82.5﹪以上,且其編碼的氨基酸同源性均在93.5﹪以上.說明這些基因均具有很高的保守性.2.采自田間的花生病葉,經(jīng)癥狀學(xué)鑒定,結(jié)果為陽性的提取其花生條紋病毒(PStV)總RNA,參照Cassidy(1993)等報道的基因序列,人工合成引物P1、P2,通過反轉(zhuǎn)錄PCR擴(kuò)增合成PStV外殼蛋白(cp

3、)基因的cDNA,并與pGEM-TEasy載體相連,經(jīng)PCR初步篩選為陽性的克隆,進(jìn)一步進(jìn)行限制性內(nèi)切酶進(jìn)行酶譜分析,并進(jìn)行全序列測定.結(jié)果表明.該基因由1084個核昔酸組成,包含了其cDNA完整的861bp編碼序列(編碼287個氨基酸)以及3'端223bp非編碼序列,與文獻(xiàn)報道的PStV-cp基因相比,全序列同源性均在96﹪以上,編碼區(qū)序列的同源性均在97﹪以上,其編碼的氨基酸同源性均在97.5﹪以上,說明PStV-cp基因具有很高的