狂犬病毒口服活疫苗的研制.pdf

1、人類與狂犬病的博弈已經(jīng)由來已久，但是時(shí)至今日，人或者動(dòng)物感染狂犬病毒后，如果未作任何醫(yī)學(xué)處理，發(fā)病后的死亡率醫(yī)學(xué)界公認(rèn)接近100％。從理論上來說，現(xiàn)在公認(rèn)的結(jié)果是，幾乎所有的飛禽走獸都可以感染和傳播狂犬病。但是最主要的傳播者是犬、貓、鼠等。雖然狂犬病無法治愈，但是人們可以對(duì)其預(yù)防控制。
　　我國狂犬病疫情世界排名第二，僅次于印度，最近幾年，隨著“寵物熱”的出現(xiàn)我國狂犬病的發(fā)病情況呈現(xiàn)上升趨勢(shì)，目前我國防治狂犬病的主要措施有以下兩種

2、方法:一種是捕殺法，易感動(dòng)物的多少直接影響著狂犬病毒疫情的控制。但是捕殺法是一種很殘酷的措施。只能在少數(shù)動(dòng)物中實(shí)施。另一種是疫苗免疫法，是我國防治狂犬病的主要措施，目前我國主要采用注射用疫苗，但是注射型疫苗無法對(duì)野生動(dòng)物大范圍接種,不能形成免疫圈。而且疫苗價(jià)格高，需經(jīng)過多次注射，注射過程冗繁。相較于注射用疫苗，口服疫苗可以在極大程度上克服以上缺點(diǎn)，口服疫苗方便、安全尤其適合散養(yǎng)犬及野生動(dòng)物的免疫，有利于建立狂犬病毒免疫群。
　　基

3、于以上問題，本課題分別從制劑學(xué)，免疫學(xué)方面展開對(duì)狂犬病毒口服疫苗的研究，以期能夠?yàn)榭袢《酒芈肚懊庖哳A(yù)防提供新的免疫疫苗。
　　研究目的：本研究以RV雞胚低代毒(Flury-lep)為模型，海藻酸鈉為緩釋材料，劑型選擇制備工藝簡(jiǎn)單的海藻酸鈣緩釋微丸，研制Flury株的口服疫苗。對(duì)制備出的口服疫苗進(jìn)行安全性，有效性，無菌性研究。
　　研究方法：采用單因素實(shí)驗(yàn)和正交試驗(yàn)相結(jié)合的方法優(yōu)化工藝處方，篩選最佳工藝處方制備出疫苗成品，轉(zhuǎn)

4、籃法測(cè)定成品的體外累積釋放曲度，參照中國生物制品規(guī)程進(jìn)行成品疫苗的無菌檢驗(yàn)。采用MTT法研究口服疫苗細(xì)胞毒性試驗(yàn)，以WHO規(guī)定的方法研究口服疫苗體內(nèi)毒性試驗(yàn)，以普通昆明小鼠為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行疫苗免疫效力實(shí)驗(yàn),分別研究疫苗的體液免疫效果和細(xì)胞免疫效果。
　　研究結(jié)果：本課題制備出包封率78.64±2.144%，載藥量17.49±1.43%的微丸，體外毒性試驗(yàn)表明微丸在每實(shí)驗(yàn)孔高達(dá)0.5mg的藥量下，作用120h，仍然不會(huì)對(duì)L929細(xì)胞生

5、長(zhǎng)造成影響，體內(nèi)試驗(yàn)結(jié)果表明小鼠正常生長(zhǎng)，無明顯異常反應(yīng)。流式分析小鼠外周血淋巴細(xì)胞CD4+和CD8+數(shù)目，結(jié)果表明CD4+和CD8+數(shù)目分別由
　　25.81±3.21%和20.51±2.26%上升到41.91±2.32%和25.70±2.11%，CD4+/CD8+的值也由1.26±0.31上升到1.63±0.68,說明小鼠有了較高的細(xì)胞免疫反應(yīng)。體液免疫檢測(cè)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物外周血中和抗體效價(jià)為1/80。無菌試驗(yàn)中各培養(yǎng)基未見細(xì)菌生長(zhǎng)。