兩種食用菌活性蛋白的分離純化及其抗病特性.pdf

1、福建農(nóng)林大學(xué)博士學(xué)位論文兩種食用菌活性蛋白的分離純化及其抗病特性姓名：吳麗萍申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：植物病理學(xué)指導(dǎo)教師：林奇英謝聯(lián)輝20040401福建農(nóng)林大學(xué)博士學(xué)位論文iI表明抗血清特異性高。以半葉法在枯斑寄主心葉煙上檢測YP4646蛋白對TMV的抑制率，發(fā)現(xiàn)有較好的抗TMV活性，其抑制TMV的中濃度C50為O240pgmL～aYP46—46蛋白對兔和人血凝集活性滴度為2一，其濃度分別為O219pgmL1。利用MGC80—3、SMM

2、C7721，及SPCAl檢測蛋白的體外抗腫瘤活性，其IC50約為20ug，mL～。YP46—46蛋白對供試的植物病原真菌和細菌均無抑制作用。對y3蛋白的抗nⅣ機制作了初步分析。結(jié)果表明y3蛋白對TMV不僅具有較強的體外鈍化作用，而且能抑制病毒在系統(tǒng)寄主煙草K326內(nèi)的復(fù)制。在心葉煙枯斑寄主上對TMV的侵染抑制中濃度約為20lagmL～；最適工作pH為90；TMV與y3蛋白混合后用RNase處理，測得侵染率為6174％，比未用RNase處

3、理的對照降低了3826％，說明y3蛋白對TMV的外殼蛋白具有～定的破壞作用；蛋白銹抑制TMVCP在體外的聚合，還能阻止TMvCP與其抗體的結(jié)合；另外電鏡觀察發(fā)現(xiàn)y3可使部分TMV粒體發(fā)生裂解，變短。通過葉綠素含量檢測顯示蛋白能在一定程度上減緩植株感病后的癥狀。提取毛頭鬼傘中的總RNA，采用RACE方法和巢式PCR技術(shù)，根據(jù)y3蛋白N端20個氨基酸序列設(shè)計引物進行了基因克隆。獲得了y3的部分eDNA序列以及3’端非編碼區(qū)。其序列長度為41

4、4bp，其中ORF長度包括終止密碼共291bp，編碼蛋白序列共96個氨基酸，3’非編碼區(qū)含有123個堿基，其中polyA為22個。經(jīng)NCBI中Blast比較沒找到同源序列。表明該基因為一全新序列(GenBank接收號：602564)。加上N一端未用來設(shè)計引物的5個堿基，全長共101個氨基酸。等電點為817。該蛋白序列中有7個半胱氨酸，可形成分子內(nèi)二硫鍵。蛋白在SwissProt登錄號P8381l(登錄時采用名稱為CAP)。關(guān)鍵詞；毛頭鬼