亞甲藍(lán)對APP-PS1小鼠海馬結(jié)構(gòu)Aβ及其相關(guān)蛋白表達(dá)的影響.pdf

1、目的：
　　 阿爾茨海默病(Alzhermer disease,AD)是引起老年癡呆的最常見因為,在AD患者及APP/PS1轉(zhuǎn)基因小鼠中均觀察到海馬結(jié)構(gòu)的UCH-L1含量及樹突棘密度的明顯降低。Rember是一種新開發(fā)的治療阿爾茨海默病(Alzheimer disease,AD)的藥物,其主要成分是亞甲藍(lán),在二期臨床試驗中表現(xiàn)出良好的療效。亞甲藍(lán)低濃度下可以使神經(jīng)元纖維纏結(jié)(Neurofibrillary tangles,NFT

2、s)溶解,極低濃度下能夠增強線粒體復(fù)合體Ⅵ功能從而延緩人胚肺成纖維細(xì)胞(IMR90)衰老。目前關(guān)于亞甲藍(lán)對阿爾茨海默病模型鼠的研究很少,而亞甲藍(lán)對APP/PS1小鼠UCH-L1及樹突棘密度的影響尚未見文獻(xiàn)報道。
　　 因此,本研究擬通過給予APP/PS1小鼠口服適量亞甲藍(lán),采用跳臺回避實驗、Western blotting、免疫熒光、高爾基染色等方法觀察亞甲藍(lán)對APP/PS1轉(zhuǎn)基因小鼠學(xué)習(xí)記憶及UCH-L1表達(dá)改變及對樹突棘密度

3、變化的的影響。本研究結(jié)果將為老年性癡呆的預(yù)防和治療以及亞甲藍(lán)的臨床應(yīng)用提供可靠的實驗依據(jù)。
　　 材料與方法
　　 1、實驗動物及分組:中國醫(yī)科大學(xué)實驗動物部提供的20只3月齡APP/PS1轉(zhuǎn)基因小鼠,以及10只同齡相同品系C57bL/6小鼠(野生型),將動物分為3組,每組10只,雌雄不限。(1)模型組:轉(zhuǎn)基因小鼠,自由飲水。(2)給藥組:根據(jù)小鼠飲水量將亞甲藍(lán)加入日常飲水中,用量約25 mg·kg-1·d-1,連用4個

4、月。(3)對照組:C57bL/6野生小鼠,不施加任何處理因素。
　　 2、跳臺回避實驗:測試各組小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力,記錄每組小鼠的錯誤次數(shù)和潛伏期。
　　 3、噻嗪紅染色:形態(tài)學(xué)鑒定APP/PS1小鼠及觀察APP/PS1小鼠海馬結(jié)構(gòu)老年斑分布。
　　 4、Elisa方法:檢測各組小鼠海馬結(jié)構(gòu)Aβ1-40、Aβ1-42的含量。
　　 5、Aβ快速染色:觀察3組小鼠海馬結(jié)構(gòu)Aβ的表達(dá)。
　　 6、免疫

5、熒及Western blotting方法:觀察各組小鼠海馬結(jié)構(gòu)UCH-L1的分布和表達(dá)情況。
　　 7、高爾基染色:觀察各組小鼠海馬CA1區(qū)樹突棘密度的變化。
　　 8、統(tǒng)計學(xué)分析:結(jié)合圖像采集分析系統(tǒng),所得數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差((x)±5)表示,應(yīng)用SPSS11.0統(tǒng)計軟件,用單因素方差分析進(jìn)行組間比較,P<0.05為有統(tǒng)計學(xué)意義,P<0.01為有顯著統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 實驗結(jié)果
　　 1、跳臺回避實驗結(jié)

6、果表明模型組小鼠各時間段的平均潛伏期較對照組明顯延長,錯誤次數(shù)增多(P<0.05),而給藥組較模型組各時間段的平均潛伏期明顯縮短,錯誤次數(shù)減少(P<0.05)。
　　 2、7月齡APP/PS1小鼠海馬結(jié)構(gòu)觀察到老年斑,而正常小鼠未觀察到。
　　 3、Elisa檢測結(jié)果顯示治療組與模型組Aβ1-40、Aβ1-42無明顯差別(P>0.05),在正常小鼠中未檢測到Aβ1-40、Aβ1-42。
　　 4、免疫熒光及免疫印

7、記結(jié)果證明了模型組小鼠海馬結(jié)構(gòu)UCH-L1的表達(dá)量較正常對照組明顯降低(P<0.01)。而治療組較模型組含量明顯增加(P<0.01)。
　　 5、高爾基銀染結(jié)果證實了給藥組小鼠海馬CA1區(qū)的第2級樹突的樹突棘平均密度較模型組增加28.79％,兩組存在明顯差異(P<0.01)。而給藥組與正常對照組之間無明顯統(tǒng)計學(xué)差異。
　　 結(jié)論
　　 1、跳臺回避實驗結(jié)果表明MB可改善APP/PS1小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力。