二氫楊梅素對(duì)APP-PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠的保護(hù)作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的:
　　研究二氫楊梅素（DHM）對(duì)APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因癡呆模型小鼠腦內(nèi)由小膠質(zhì)細(xì)胞調(diào)節(jié)的神經(jīng)炎癥的影響，并探討其發(fā)揮作用的潛在機(jī)制。
　　方法：
　　在體外實(shí)驗(yàn)中，以20μ g/ml Aβ1-42刺激BV2細(xì)胞24 h誘導(dǎo)其活化，通過2.5μ g/ml DHM及等濃度的DMSO稀釋液干預(yù)BV2細(xì)胞24 h，分別作為治療組和對(duì)照組，采用Western Blot檢測(cè)腫瘤壞死因子TNFα、小膠質(zhì)細(xì)胞M1和M2表型的表達(dá)

2、水平。在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，取4月齡的雌性、雄性APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因癡呆模型小鼠共32只，隨機(jī)分為藥物處理2周及4周DHM治療組和DMSO對(duì)照組，共4組，每組實(shí)驗(yàn)小鼠8只。治療組小鼠按1 mg/（kg·d）的用量經(jīng)腹腔注射DHM，對(duì)照組小鼠腹腔注射等量經(jīng)生理鹽水稀釋的DMSO溶液，運(yùn)用免疫熒光和Western Blot的方法評(píng)估DHM對(duì)小膠質(zhì)細(xì)胞活化，NLRP3炎癥小體組件及炎癥因子 IL-1β、腫瘤壞死因子TNFα產(chǎn)生的影響。通過Weste

3、rn Blot結(jié)合ELISA檢測(cè)技術(shù)，從蛋白水平檢測(cè)是否DHM治療影響癡呆小鼠腦內(nèi)β淀粉樣蛋白(Aβ)的生成和沉積，以及它對(duì)Aβ前體蛋白（APP）、β分泌酶（BACE1）和腦啡肽酶（NEP）的影響。運(yùn)用免疫熒光染色觀察4組小鼠腦內(nèi)M1、M2型小膠質(zhì)細(xì)胞表型的表達(dá)情況。最后，通過水迷宮檢測(cè)是否二氫楊梅素能夠改善 AD的空間記憶及認(rèn)知功能障礙。
　　結(jié)果：
　　DHM治療能夠有效改善AD小鼠的記憶和認(rèn)知功能障礙，能夠減少小鼠腦內(nèi)

4、海馬及皮質(zhì)區(qū)活化小膠質(zhì)細(xì)胞的數(shù)量。同時(shí)，治療后小鼠呈現(xiàn)出NLRP3炎癥小體的活化抑制及炎癥小體組件的表達(dá)減少，且在DHM治療組小鼠腦內(nèi)炎癥因子IL-1β、TNFa的表達(dá)較對(duì)照組相比呈下降趨勢(shì)。離體實(shí)驗(yàn)結(jié)果同樣證明，與對(duì)照組比較，DHM治療能夠明顯抑制活化的BV2細(xì)胞釋放致炎因子TNFα。另外，通過增加NEP的表達(dá)，減少誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（iNOS）的表達(dá)水平和增加精氨酸酶1（Arginase-1）的表達(dá)，DHM治療能夠加強(qiáng)小膠質(zhì)細(xì)胞對(duì)A