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1、目的:研究絲裂原活化蛋白激酶磷酸酶-1(Mitogen-activated protein kinase phosphatase-1, MKP-1)在不同月齡段APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因阿爾茨海默?。ˋlzheimer's Disease, AD)模型小鼠及其同窩野生型小鼠腦內(nèi)的分布及表達(dá)差異,以探討MKP-1在AD病理發(fā)生發(fā)展過程中所起的作用。
方法:選擇3月、8月和12月齡的APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠及其同月齡段的野生型小鼠作
2、對(duì)比,運(yùn)用免疫組化觀察AD模型小鼠及其同窩野生型小鼠腦內(nèi)MKP-1的分布及表達(dá);免疫熒光檢測(cè)MKP-1在不同年齡段AD模型小鼠腦內(nèi)的變化;Western Blot檢測(cè)MKP-1、腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(brain derived neurotrophic factor,BDNF)、細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶(extracellular signal-regulated kinases,ERK)、p-ERK、c-Jun氨基端激酶(c-JUN N-te
3、rminal kinases,JNK)、p-JNK、P38激酶同工酶(P38 kinases,p38)及p-p38的變化;Real Time-PCR檢測(cè)MKP-1和BDNF的mRNA的變化,激光共聚焦檢測(cè)MKP-1和4G8、p-ERK和4G8、p-JNK和4G8、p-p38和4G8共表達(dá)情況。
結(jié)果:1.形態(tài)學(xué)結(jié)果:1)MKP-1在APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠腦內(nèi)廣泛分布,包括大腦皮質(zhì)、海馬、紋狀體、嗅球和小腦等;MKP-1免疫
4、陽(yáng)性細(xì)胞在APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠腦內(nèi)的數(shù)量明顯低于同月齡的正常對(duì)照組(P<0.05),且隨著APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠月齡的增加,MKP-1免疫陽(yáng)性細(xì)胞的數(shù)量逐漸降低;實(shí)驗(yàn)還發(fā)現(xiàn),MKP-1免疫陽(yáng)性物形成類似老年斑的斑塊;免疫熒光雙標(biāo)結(jié)果顯示,與4G8陽(yáng)性斑塊(此即老年斑)相比,MKP-1陽(yáng)性斑塊的數(shù)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于4G8陽(yáng)性斑塊的數(shù)量,但是MKP-1只能表達(dá)出部分老年斑,隨著APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠月齡的增加,表達(dá)的老年斑數(shù)目也逐漸增
5、加。
2.Western blot結(jié)果:隨著APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠月齡的增加, MKP-1(P<0.05)和BDNF(P<0.05)的蛋白表達(dá)明顯減弱,JNK(P>0.05)、ERK(P>0.05)和P38(P>0.05)的變化無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異而p-JNK(P<0.05)、p-ERK(P<0.05)和p-P38(P<0.05)則蛋白表達(dá)明顯上調(diào)。
結(jié)論:MKP-1在APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因不同年齡段小鼠腦內(nèi)及與其同窩野
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