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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:
1.判斷APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠的臨床前期,為以后基于APP/PS1模型小鼠的早期干預(yù)奠定基礎(chǔ);
2.評(píng)價(jià)超聲對(duì)處于臨床前期APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠早期干預(yù)的有效性。
方法:
1.依據(jù)美國(guó)國(guó)立老年研究院-阿爾茲海默病協(xié)會(huì)(National Institute of Aging-Alzheimer's Association,NIA-AA)標(biāo)準(zhǔn)和國(guó)際工作組(International W
2、orking Group,IWG)2標(biāo)準(zhǔn),以一月齡APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠及同齡非轉(zhuǎn)基因?qū)φ招∈鬄閷?shí)驗(yàn)開始批次,依次對(duì)遞增一個(gè)月月齡的兩組同齡小鼠進(jìn)行Y迷宮行為學(xué)測(cè)試認(rèn)知記憶能力、酶聯(lián)免疫復(fù)合反應(yīng)測(cè)量淀粉樣蛋白含量和免疫組化測(cè)定老年斑來(lái)判斷APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠的阿爾茲海默病臨床前期;判斷標(biāo)準(zhǔn)為同齡小鼠間行為學(xué)無(wú)差異,而淀粉樣蛋白含量或老年斑有差異;
2.依據(jù)實(shí)驗(yàn)參數(shù)及食品藥品監(jiān)督管理局(Food and Drug Ad
3、ministration,F(xiàn)DA)相關(guān)標(biāo)準(zhǔn),研制一套配備超聲治療頭的超聲實(shí)驗(yàn)裝置,然后應(yīng)用該裝置對(duì)處于臨床前期的APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠進(jìn)行超聲干預(yù),干預(yù)參數(shù)為:①功率:P=0.3W/cm2;②頻率:f=1MHz;③作用時(shí)間:每次10min,一共持續(xù)6周(week,w);同時(shí)設(shè)立對(duì)照組以驗(yàn)證早期干預(yù)的有效性;
3.通過(guò)兩種行為學(xué)評(píng)價(jià)方法—水迷宮和Y迷宮,評(píng)價(jià)治療超聲對(duì)實(shí)驗(yàn)小鼠認(rèn)知記憶能力的影響;通過(guò)酶聯(lián)免疫復(fù)合反應(yīng)測(cè)定小鼠腦
4、中的淀粉樣蛋白含量;通過(guò)免疫組化判斷小鼠腦內(nèi)老年斑,以綜合判斷超聲早期干預(yù)的有效性。
結(jié)果:
1.三批小鼠的Y迷宮行為學(xué)之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05);一月齡、二月齡及三月齡APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠與同齡對(duì)照組小鼠的腦部海馬區(qū)域均沒(méi)有發(fā)現(xiàn)老年斑,一月齡和二月齡APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠與同齡對(duì)照組小鼠相比,其腦內(nèi)淀粉樣蛋白含量無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05),而三月齡的APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠腦中的淀粉樣蛋白含量高
5、于同齡對(duì)照組小鼠(三月齡APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠:1310.49±131.94pg/g,同齡對(duì)照組:700.10±101.65pg/g,P<0.05)??梢跃C合判斷三月齡APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠處于阿爾茲海默病的臨床前期;
2.應(yīng)用自制的超聲實(shí)驗(yàn)裝置對(duì)處于臨床前期的APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠進(jìn)行6w的超聲早期干預(yù)后,進(jìn)行干預(yù)效果的評(píng)價(jià)。①Y迷宮行為學(xué)測(cè)試,三組小鼠的行為學(xué)結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(F=6.78,P<0.05)。非轉(zhuǎn)
6、基因?qū)φ战M(CN組)與超聲干預(yù)APP/PS1組(US組)在交替選擇比例上無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05),而CN組和APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因?qū)φ战M(AD組)存在交替選擇比例的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05),AD組與US組存在交替選擇比例的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。②兩階段的水迷宮行為學(xué)測(cè)試。第一階段:定位航行階段檢驗(yàn)小鼠學(xué)習(xí)能力,三組小鼠尋找平臺(tái)的潛伏期之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(F=15.43,P<0.05)。US組尋找平臺(tái)的潛伏期與CN組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異
7、(P>0.05),而AD組尋找平臺(tái)的潛伏期長(zhǎng)于CN組(P<0.05)。從第三天開始CN組的尋找平臺(tái)的潛伏期短于AD組(CN組:23.98±17.57s,AD組39.37±18.31s,P<0.05),第四天開始US組尋找平臺(tái)的潛伏期短于AD組(US組:20.52±13.36s,AD組:38.01±18.19s,P<0.05),而CN組與US組之間尋找隱藏平臺(tái)的潛伏期無(wú)差異(P>0.05);同時(shí)三組小鼠之間的游泳速度之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(F=
8、1.16,P>0.05)。第二階段,三組小鼠在SE象限的停留時(shí)間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(US組:16.64±6.56s,CN組:19.53±7.72s,AD組:8.89±2.47s,F(xiàn)=6.91,P<0.05)。AD組比CN組在SE象限停留時(shí)間明顯減少(P<0.05);且AD組在SE象限的停留時(shí)間也少于US組(P<0.05),US與CN組之間在SE象限的停留時(shí)間上無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05);三組小鼠的游泳速度之間沒(méi)有差別(F=1.44,P>0.
9、05)。③CN組小鼠及US組小鼠腦中海馬區(qū)域未發(fā)現(xiàn)老年斑,而AD組中發(fā)現(xiàn)少量的淀粉樣蛋白沉積。④三組小鼠腦中淀粉樣蛋白含量有明顯差別(F=71.12,P<0.001)。AD組小鼠腦中的淀粉樣蛋白高于CN組(AD組:4201.24±700.87pg/g,CN組:769.83±120.50pg/g,P<0.001),經(jīng)超聲處理過(guò)后的US組APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠腦中淀粉樣蛋白含量水平低于AD組(US組:1371.26±229.97pg/g
10、,P<0.001),處理過(guò)后US組小鼠腦中的淀粉樣蛋白含量與CN組之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
結(jié)論:
1.通過(guò)行為學(xué)測(cè)試和生化指標(biāo)的檢測(cè)配合,能夠初步判定APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠的AD臨床前期開始時(shí)間為三月齡;
2.對(duì)處于臨床前期的APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠進(jìn)行早期超聲干預(yù)后,其行為學(xué)和生化指標(biāo)結(jié)果表明,超聲能夠改善處于臨床前期的APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠的認(rèn)知行為能力,且能有效促使小鼠腦中的淀粉
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