利培酮和帕利哌酮在SD大鼠前額葉皮質(zhì)、紋狀體和伏隔核的分布研究.pdf

1、一、目的
　　 借助微透析技術(shù)研究分別單次給予抗精神病藥物利培酮和帕利哌酮后，藥物在SD大鼠血液和大腦中央前額葉皮質(zhì)(mPFC)、紋狀體(STR)和伏隔核(NAc)的分布，考察藥物在大腦的分布是否有區(qū)域特異性，探索血液和腦組織藥物濃度的相關(guān)性。
　　 二、方法
　　 1.建立同時(shí)測(cè)定透析液中利培酮和帕利哌酮濃度的方法
　　 采用在線萃取聯(lián)合HPLC-MS/MS建立同時(shí)測(cè)定大鼠血液和腦微透析液中利培酮和帕利

2、哌酮濃度的方法，并對(duì)實(shí)際透析液測(cè)定過(guò)程中可能遇到的問(wèn)題（轉(zhuǎn)移損失、空白基質(zhì)不足等）進(jìn)行考察，尋求解決方法。
　　 2.微透析技術(shù)采集樣品
　　 2.1探針回收率的考察
　　 分別用相對(duì)回收率和相對(duì)損失率的方法考察探針對(duì)不同濃度藥物（利培酮和帕利哌酮分別進(jìn)行）的體外回收率，以及體內(nèi)回收率在采樣過(guò)程中的變化情況，制定準(zhǔn)確反映采樣狀態(tài)下體內(nèi)回收率的方案。
　　 2.2微透析采樣
　　 健康雄性SD大鼠(

3、250-300 g)在麻醉狀態(tài)下植入血液探針，腦探針借助立體定位儀分別定位于mPFC、STR或NAc。大鼠術(shù)后恢復(fù)24 h，腹腔注射給予利培酮或帕利哌酮(4 mg/kg)，每隔20 min同時(shí)收集血液和腦組織透析液，連續(xù)收集600 min。2.3樣品測(cè)定和統(tǒng)計(jì)分析
　　 采用在線萃取聯(lián)合HPLC-MS/MS同時(shí)測(cè)定SD大鼠樣品（血液和腦透析液）中利培酮和帕利哌酮的濃度。測(cè)定結(jié)果用體內(nèi)回收率進(jìn)行校正后，用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)

4、計(jì)分析。
　　 三、結(jié)果
　　 1.微透析樣品中利培酮和帕利哌酮濃度的測(cè)定建立了同時(shí)測(cè)定微透析樣品中利培酮和帕利哌酮濃度的方法。進(jìn)樣量30μL，所選內(nèi)標(biāo)為羅格列酮（3 ng/mL）。樣品中藥物濃度低，轉(zhuǎn)移損失顯著（利培酮和帕利哌酮回收率分別為44.51％和50.62％）。分別考察甲醇、乙二醇、丙二醇、乙腈、維生素C和表面活性劑十二烷基磺酸鈉的效果，其中50％乙腈萃取效果較好（回收率分別為93.66％和95.32％）。經(jīng)驗(yàn)

5、證，可以用空白林格氏液代替血液和腦透析液進(jìn)行部分方法學(xué)考察。利培酮和帕利哌酮在0.05-100 ng/m L濃度范圍內(nèi)線性良好(r2＞0.996)。回收率、精密度和準(zhǔn)確度經(jīng)考察合格，樣品中質(zhì)量控制結(jié)果均符合要求(RSD在土15％以?xún)?nèi))。
　　 2.微透析實(shí)驗(yàn)
　　 2.1探針回收率的考察
　　 結(jié)果表明，利培酮和帕利哌酮的體外回收率不隨透析方向（透析或反透析）、藥物濃度的改變而變化;體內(nèi)回收率不隨采樣時(shí)間的延長(zhǎng)而

6、改變。由此制定測(cè)定體內(nèi)回收率的方案為:采樣結(jié)束后用反透析法考察探針對(duì)單一濃度(腦組織濃度為25 ng/ml，血液濃度為200ng/ml)藥物的體內(nèi)回收率，每只大鼠結(jié)果用自身的體內(nèi)回收率進(jìn)行校正。
　　 2.2.利培酮和帕利哌酮的腦血分布
　　 無(wú)論是血液還是腦組織中，利培酮與帕利哌酮相比，達(dá)峰時(shí)間早、峰濃度高，半衰期短。在血液中，給予利培酮后，利培酮迅速代謝為帕利哌酮，兩者均在0.5-1 h達(dá)峰。大約2h后，帕利哌酮的濃

7、度開(kāi)始高于利培酮。利培酮和帕利哌酮在血液中藥-時(shí)曲線下面積(AUC)的差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;單次給予帕利哌酮后，血液中帕利哌酮迅速達(dá)峰(0.5 h)，AUC高于單獨(dú)給予利培酮后總有效成分（利培酮+帕利哌酮）的水平。
　　 無(wú)論給予利培酮還是帕利哌酮，腦內(nèi)藥物迅速(約0.5 h)達(dá)峰，1.5-3 h后帕利哌酮濃度開(kāi)始高于利培酮。利培酮、帕利哌酮以及總有效成分的AUC由高到低順序均為:NAc≥STR≥mPFC。利培酮在伏隔核的集中分布

8、顯著（前額葉皮質(zhì)和紋狀體分別P=0.042和0.027）;帕利哌酮在伏隔核和紋狀體的分布較均一，在前額葉皮質(zhì)分布較少。
　　 藥物在各腦區(qū)的腦血比(B/P)結(jié)果與AUC一致。利培酮的B/P在NAc(0.37-0.43)，而在STR(0.30-0.39)和mPFC(0.23-0.31)次之;帕利哌酮在NAc(0.20-0.28)和STR(0.24-0.28)相近，在mPFC(0.15-0.18)相對(duì)較低。相比之下，利培酮的B/P高

9、于帕利哌酮（mPFC、 STR和NAc分別為1.53、1.34和1.93倍）。整個(gè)采樣過(guò)程中，利培酮B/P波動(dòng)較帕利哌酮大。無(wú)論利培酮還是帕利哌酮，腦組織與血藥濃度都存在相關(guān)性(P＜0.001)。
　　 四、結(jié)論
　　 1.在所研究的mPFC、STR和NAc三個(gè)腦區(qū)中，利培酮在NAc有顯著的集中分布，而帕利哌酮在STR和NAc的分布較均一，在mPFC分布相對(duì)較少。
　　 2.與利培酮相比，帕利哌酮能夠更平穩(wěn)地從血