創(chuàng)傷弧菌外膜蛋白疫苗對(duì)斜帶石斑魚(yú)浸泡免疫的初步研究.pdf

1、本文從廣東深圳患病的鰻鱺肝臟分離到一株致病菌AnGS020501，經(jīng)鑒定為創(chuàng)傷弧菌，對(duì)其外膜蛋白的提取方法進(jìn)行了探討，與分離自不同地區(qū)、宿主菌株的外膜蛋白進(jìn)行了比較分析，探索外膜蛋白作為疫苗對(duì)海水魚(yú)創(chuàng)傷弧菌的免疫保護(hù)效果，為海水魚(yú)弧菌病的防治打下基礎(chǔ)。首先研究了創(chuàng)傷弧菌的分離、鑒定及其毒力，從自然發(fā)病的鰻鱺肝臟中分離到一優(yōu)勢(shì)菌株AnGS020501，經(jīng)鑒定確認(rèn)該菌為創(chuàng)傷弧菌。人工感染試驗(yàn)表明，創(chuàng)傷弧菌AnGS020501菌株不僅對(duì)鰻鱺，

2、對(duì)羅非魚(yú)、鯽魚(yú)、斜帶石斑魚(yú)及小鼠也有很強(qiáng)的毒力。其次，進(jìn)行了外膜蛋白三種提取方法的比較，比較了SDS法、PMSF法及Sarkosyl法提取創(chuàng)傷弧菌AnGS020501菌株外膜蛋白的差異，認(rèn)為Sarkosyl法分離制備外膜蛋白的效果較好。然后，對(duì)不同弧菌外膜蛋白的免疫原性進(jìn)行了分析，多數(shù)菌株的外膜蛋白與兔抗創(chuàng)傷弧菌全菌血清、兔抗創(chuàng)傷弧菌外膜蛋白血清、鼠抗創(chuàng)傷弧菌外膜蛋白41kDa蛋白血清有一條共同的免疫反應(yīng)帶，分子量約為41Kda。41k

3、Da的外膜蛋白可能是這些菌株的共同抗原。最后，研究了創(chuàng)傷弧菌外膜蛋白疫苗對(duì)斜帶石斑魚(yú)的免疫效果，以創(chuàng)傷弧菌外膜蛋白等制備成疫苗，對(duì)鯽魚(yú)接種后，探討不同接種途徑、佐劑IMS1312疫苗對(duì)鯽魚(yú)免疫的影響，旨為制備海水魚(yú)弧菌病疫苗提供基礎(chǔ)資料。結(jié)果表明：各組都能有效的刺激鯽魚(yú)產(chǎn)生抗體；免疫25d后對(duì)鯽魚(yú)攻毒，注射免疫組中，IMS1312+OMP-Ⅱ組最差，全菌組、OMP-Ⅱ(400μg/mL)組的免疫保護(hù)率最高；浸泡免疫組中，20ppmIMS