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文檔簡(jiǎn)介
1、本研究的目的是檢測(cè)奶牛消化道上皮游離氨基酸(AA)和小肽轉(zhuǎn)運(yùn)載體的組織分布,探討粗飼料來(lái)源對(duì)這些轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白表達(dá)的影響。18頭荷斯坦奶牛被隨機(jī)分到3組日糧中(n=6):AH:苜蓿干草為主要粗飼料;CS:玉米秸稈為主要粗飼料:RS:稻草為主要粗飼料。飼養(yǎng)試驗(yàn)后結(jié)束后,屠宰奶牛采取消化道內(nèi)容物及上皮組織(瘤胃、瓣胃、十二指腸、空腸和回腸),完成后續(xù)分析。獲得的主要試驗(yàn)結(jié)果如下。
1.不同部位消化道內(nèi)容物的游離氨基酸和肽結(jié)合氨基酸含量(
2、試驗(yàn)一)將瘤胃液、瓣胃食糜及小腸食糜取出,解凍后兩次離心取上清液,加入三氯乙酸沉淀蛋白質(zhì)。將處理好的澄清上清液直接用AA自動(dòng)分析儀測(cè)定游離AA濃度;以6 mol/L HCl水解后的總AA與游離AA含量之差作為肽結(jié)合氨基酸(PBAA)。結(jié)果發(fā)現(xiàn),在瘤胃中游離AA濃度為AH組和RS組高于CS組(P<0.01),而PBAA的濃度為AH組高于CS組,RS組和其它兩組差異不顯著(P=0.1)。在瓣胃、十二指腸和空腸食糜中,游離AA和PBAA濃度在
3、不同日糧下差異不顯著(P>0.05)。PBAA和游離AA的比值在前胃和十二指腸相似(數(shù)值=1),而這一比率的數(shù)值在空腸小于1,這可能表明,PBAA在空腸得到充分的消化和分解,或者空腸對(duì)PBAA的吸收能力較強(qiáng)。
2.不同部位消化道組織的氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)載體含量(試驗(yàn)二)
取出凍存的消化道組織,在液氮中研磨成粉狀后提取RNA和蛋白,用于后續(xù)的qRT-PCR和western blot,測(cè)定消化道上皮細(xì)胞的幾種重要AA轉(zhuǎn)運(yùn)載體(A
4、SCT2、CAT1、LAT1和ATB0,+) mRNA與蛋白的表達(dá)豐度,其中ASCT2和LAT1轉(zhuǎn)運(yùn)中性AA,ATB0,+轉(zhuǎn)運(yùn)中性和堿性AA,而CAT1轉(zhuǎn)運(yùn)堿性AA。結(jié)果發(fā)現(xiàn),消化道不同部位ATB0,+、ASCT2、LAT1和CAT1都有表達(dá),但不同部位表達(dá)量存在顯著差異(P<0.05)。5種載體在空腸的表達(dá)量都高于其它幾個(gè)部位,表明空腸可能是奶牛蛋白質(zhì)消化吸收的主要部位。試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)前胃也表達(dá)較高水平的AA轉(zhuǎn)運(yùn)載體,說(shuō)明前胃的吸收作用不能
5、忽視。三組日糧處理下AA轉(zhuǎn)運(yùn)載體的表達(dá)豐度有顯著差異:在瘤胃、瓣胃和十二指腸上皮,三組日糧處理下AA轉(zhuǎn)運(yùn)載體的表達(dá)豐度相似(P>0.05);在空腸部位,CS組的ASCT2蛋白表達(dá)豐度高于AH組和RS組(P<0.05);回腸部位的ATB0,+mRNA表達(dá)豐度在不同處理下差異顯著(P<0.05),AH組最高,CS最低。不同的粗飼料資源導(dǎo)致AA轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白表達(dá)豐度發(fā)生變化,表明日糧對(duì)AA在消化道的吸收轉(zhuǎn)運(yùn)有調(diào)控作用。
3.不同部位消化道
6、組織的肽結(jié)合氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)載體含量(試驗(yàn)三)
取出凍存的消化道組織,在液氮中研磨成粉狀,然后提取RNA和蛋白,用于后續(xù)的qRT-PCR和western blot。該試驗(yàn)的目的是檢測(cè)小肽轉(zhuǎn)運(yùn)載體(PEPT1)在奶牛消化道上皮的表達(dá)分布,評(píng)價(jià)不同粗飼料對(duì)PEPT1表達(dá)的影響作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn),消化道5個(gè)部位皆表達(dá)PEPT1,但不同部位表達(dá)量存在顯著差異(P<0.05):在空腸的mRNA表達(dá)量最高,在回腸的蛋白表達(dá)量最高,表明空腸和回腸是奶
7、牛小肽吸收能力最強(qiáng)的部位。試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)前胃也表達(dá)較高水平的PEPT1表達(dá)。不同日糧處理下,PEPT1的表達(dá)差異顯著:在瘤胃中,RS組的PEPT1 mRNA表達(dá)量最高,AH和CS組差異不顯著(P<0.05);在瓣胃,AH組PEPT1的mRNA表達(dá)豐度高于CS組(P<0.05);在十二指腸,三組日糧處理下PEPT1的表達(dá)豐度相似(P>0.05);在空腸部位,AH組的PEPT1蛋白表達(dá)豐度較低,但是CS組和RS組差異不顯著;回腸部位的PEPT1m
8、RNA表達(dá)豐度在不同處理下差異顯著(P<0.05),AH組最高,CS最低。不同的粗飼料資源導(dǎo)致小肽轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白表達(dá)豐度發(fā)生類(lèi)似變化,表明小肽蛋白質(zhì)在消化道的吸收轉(zhuǎn)運(yùn)受日糧營(yíng)養(yǎng)組分的調(diào)控。
綜上所述,本研究發(fā)現(xiàn)4種與AA轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)的轉(zhuǎn)運(yùn)載體(CAT1、ATB0,+、ASCT2和LAT1)和PEPT1在奶牛胃腸道上皮細(xì)胞均有表達(dá),且在奶牛胃腸道不同部位的表達(dá)量差異顯著,在空腸表達(dá)量最大,提示空腸是AA和小肽吸收能力最強(qiáng)的部位;不同粗飼料
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