肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子在牙髓中的表達(dá)及生物學(xué)作用.pdf

1、肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(hepatocyte growth factor,HGF)是一種間充質(zhì)來(lái)源的多效性細(xì)胞因子，通過(guò)與其跨膜受體c-met結(jié)合對(duì)多種組織器官的生長(zhǎng)發(fā)育、形態(tài)發(fā)生、組織修復(fù)再生具有重要的生理調(diào)節(jié)功能。HGF已被發(fā)現(xiàn)對(duì)肝細(xì)胞、上皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞等具有顯著的促細(xì)胞分裂、運(yùn)動(dòng)作用，此外還在血管生成、上皮間充質(zhì)細(xì)胞相互間作用中有重要的地位。牙髓組織作為一種外胚間充質(zhì)來(lái)源的組織，其損傷的修復(fù)源于牙髓組織中的間充質(zhì)細(xì)胞的分化能力和組

2、織的修復(fù)能力，本課題首次對(duì)肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子在牙髓修復(fù)中的作用進(jìn)行研究，初步闡明了HGF在牙髓修復(fù)中的作用機(jī)制。 本研究采用了免疫組織化學(xué)方法和分子生物學(xué)方法，利用體外細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，對(duì)肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子及其受體在正常牙髓組織和細(xì)胞中的表達(dá)情況進(jìn)行了研究；采用動(dòng)物模型研究HGF在修復(fù)性牙本質(zhì)形成過(guò)程中的表達(dá)情況；此外還對(duì)HGF對(duì)體外培養(yǎng)的人牙髓細(xì)胞的生物學(xué)作用進(jìn)行了系統(tǒng)研究，探討其對(duì)牙髓細(xì)胞生長(zhǎng)、分化的影響，并對(duì)ERK/MAPK信號(hào)通路

3、在其中的作用進(jìn)行了初步研究。本實(shí)驗(yàn)擬通過(guò)系統(tǒng)的實(shí)驗(yàn)研究，對(duì)肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子在牙髓修復(fù)中的作用機(jī)制進(jìn)行研究，也為牙髓病變的早期修復(fù)尋找新的生物學(xué)途徑。本實(shí)驗(yàn)共分為四個(gè)部分： 第一部分：肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子在牙髓中的表達(dá)。采用免疫組化、細(xì)胞培養(yǎng)和分子生物學(xué)方法研究肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子及其受體在正常牙髓組織、牙髓細(xì)胞中的表達(dá)情況：發(fā)現(xiàn)體外培養(yǎng)的牙髓細(xì)胞可檢測(cè)出HGFmRNA及C-METmRNA的表達(dá)，HGF在體外培養(yǎng)的牙髓細(xì)胞中胞漿呈陽(yáng)性表達(dá)，胞

4、核陰性表達(dá)；在健康離體牙的牙髓組織中成牙本質(zhì)細(xì)胞層和血管內(nèi)皮細(xì)胞胞漿均呈弱陽(yáng)性表達(dá)。 第二部分：肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子在大鼠修復(fù)性牙本質(zhì)中的表達(dá)。采用動(dòng)物模型和免疫組化，研究肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子在大鼠牙髓修復(fù)過(guò)程中的表達(dá)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：修復(fù)性牙本質(zhì)形初期(3d)，肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子在大鼠牙髓細(xì)胞及成牙本質(zhì)細(xì)胞胞漿中呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，積分光密度值為8.995±0.943；損傷后15d表達(dá)呈陽(yáng)性(5.624±0.951)，但逐漸減弱，30d(4.07

5、3±0.127)和正常對(duì)照組大鼠牙髓細(xì)胞及成牙本質(zhì)細(xì)胞胞漿中呈弱陽(yáng)性表達(dá)(4.279±0.348)。說(shuō)明HGF參與了牙髓損傷早期修復(fù)及修復(fù)性牙本質(zhì)形成的過(guò)程。 第三部分：肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子對(duì)牙髓細(xì)胞生物學(xué)作用的研究。采用細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞生物學(xué)檢測(cè)及分子生物學(xué)方法，了解肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子對(duì)牙髓細(xì)胞生長(zhǎng)、分化的影響。 第四部分ERK/MAPK通路在肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子對(duì)牙髓細(xì)胞作用中的作用研究。采用用100μg/L HGF作用于細(xì)胞，ER

6、K/MAPK通路阻斷劑U0126預(yù)處理細(xì)胞，分析ERK/MAPK信號(hào)通路在外源性HGF促進(jìn)人牙髓細(xì)胞分化過(guò)程中所起的作用。 結(jié)論：牙髓細(xì)胞中有肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子及其受體的表達(dá)，在早期修復(fù)性牙本質(zhì)形成中的表達(dá)明顯上調(diào)。外源性肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子對(duì)人牙髓細(xì)胞的生長(zhǎng)有明顯的促進(jìn)作用，可縮短牙髓細(xì)胞的G1期；增強(qiáng)牙髓細(xì)胞的堿性磷酸酶活性，促進(jìn)堿性磷酸酶和牙本質(zhì)涎磷蛋白在基因和蛋白水平的表達(dá)，促進(jìn)牙髓細(xì)胞的分化；MAPK通路參與了肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子對(duì)牙