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1、肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(Hepatocyte growth factor.HGF)是一種多肽生長(zhǎng)因子,首先從部分肝臟切除大鼠的血清中提取。由于其對(duì)肝細(xì)胞具有強(qiáng)的絲裂原作用。因此命名為肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子。最初它僅僅被認(rèn)為是肝細(xì)胞增殖的絲裂原之一,以后逐漸發(fā)現(xiàn)其具有促進(jìn)腫瘤進(jìn)展的多種功能,HGF生物學(xué)活性是由原癌基因c-met編碼的跨膜受體蛋白所介導(dǎo),對(duì)卵巢癌等多種腫瘤的失控性生長(zhǎng)發(fā)揮重要的作用。 HGF與c-met結(jié)合后,受體發(fā)生自身磷酸化,
2、由此激活受體的內(nèi)在酪氨酸激酶活性,進(jìn)而引起細(xì)胞內(nèi)一系列信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的級(jí)聯(lián)激活,從而調(diào)節(jié)細(xì)胞的增殖、分化、運(yùn)動(dòng)和血管生成等。卵巢惡性腫瘤細(xì)胞中HGF/c- met的表達(dá)與MVD指數(shù)密切相關(guān),提示可能由于細(xì)胞HGF/c- met蛋白異常高表達(dá),導(dǎo)致其對(duì)HGF敏感性增強(qiáng),從而促使該細(xì)胞過(guò)度增殖、分化乃至惡化[3]。 HGF是一種血管生成的強(qiáng)大誘導(dǎo)劑,可誘發(fā)內(nèi)皮細(xì)胞增殖和遷移,刺激體內(nèi)新血管的生成。因此,本課題旨在通過(guò)研究HGF及其受體
3、在卵巢癌細(xì)胞中的表達(dá),揭示HGF及其受體在卵巢癌等多種腫瘤的失控性生長(zhǎng)及其轉(zhuǎn)移過(guò)程中發(fā)揮的重要作用,并進(jìn)一步探討抗卵巢癌藥物紫杉醇對(duì)HGF/c- met信號(hào)傳導(dǎo)通路的調(diào)控。 目的: 1.明確HGF 及其受體c- met 基因及其蛋白在卵巢癌中的表達(dá)規(guī)律。 2.明確HGF與c-met在卵巢癌中表達(dá)的相關(guān)關(guān)系。 3.明確HGF/c-met 在卵巢癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移過(guò)程中的作用。 4.探討抗卵巢癌藥物紫杉醇
4、對(duì)HGF/c- met表達(dá)及作用的影響。 方法: 1.免疫組化檢測(cè)HGF/c-met蛋白在人卵巢癌組織中的表達(dá)水平。 2. RT—PCR,原位雜交技術(shù)檢測(cè)體外培養(yǎng)的人卵巢癌細(xì)胞中HGF/c-met基因的表達(dá)水平。 3.Transwell侵襲小室檢測(cè)HGF/c-met對(duì)卵巢癌細(xì)胞侵襲能力的影響。 4.MTT 法、掃描電鏡分析紫杉醇干預(yù)后對(duì)人卵巢癌細(xì)胞生長(zhǎng)的影響。 結(jié)果: 1.卵巢腫瘤
5、組織中存在HGF/c-met蛋白的高水平表達(dá), 二者與卵巢癌的發(fā)生、侵襲和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。 2. 體外培養(yǎng)的人卵巢癌細(xì)胞系H0-8910中存在HGF mRNA及c-metmRNA表達(dá),一定濃度的HGF可以上調(diào)c-met的表達(dá)。 3. Transwell小室培養(yǎng)24小時(shí)后用fibronectin將穿透的細(xì)胞粘在膜的反面,染色后顯微鏡下人工計(jì)數(shù),發(fā)現(xiàn)HGF/c-met誘導(dǎo)組的細(xì)胞侵襲能力明顯增強(qiáng)。 4. 掃描電鏡下觀察
6、,發(fā)現(xiàn)HGF/c-met在細(xì)胞核細(xì)胞膜均表達(dá)強(qiáng)烈.但是在另一組加入一定工作濃度的紫衫醇后發(fā)現(xiàn)抑制其表達(dá),顯示圖象所需激發(fā)電壓也增高。 結(jié)論: 1.體外培養(yǎng)的卵巢癌腫瘤細(xì)胞和人的卵巢腫瘤組織中均存在著HGF/c-met的明顯表達(dá),而且呈相關(guān)關(guān)系。 2.HGF/c-met基因及其蛋白表達(dá),使人卵巢癌細(xì)胞的侵襲能力明顯增強(qiáng)。 3.抑制HGF/c-met基因及其蛋白的表達(dá),是紫杉醇對(duì)卵巢腫瘤細(xì)胞抑制殺傷作用的重要
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