重組人肝細(xì)胞生長因子在畢赤酵母中的表達.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的：
　　1.建立有效的真核表達體系。
　　2.分泌表達出具有生物活性的HGF蛋白。
　　方法：
　　本研究首次利用pGAPZαA這一真核表達載體表達HGF蛋白。我們從gene bank上找到HGF全長片段，然后根據(jù)真核表達偏愛密碼子將其合成。為得到二級結(jié)構(gòu)的HGF蛋白，我們在494位氨基酸Arg和495位氨基酸Val間添加了腸激酶序列。將HGF和pGAPZαA質(zhì)粒雙酶切后行連接轉(zhuǎn)化，構(gòu)建穿梭載體pGAPZαA

2、-HGF，測序后將穿梭載體進行線性化，然后電轉(zhuǎn)化入畢赤酵母GS115進行表達，分別在24h，48h，72h，96h取樣。將得到的蛋白行親和層析純化，然后行Western Blot檢測。最后分離小鼠原代肝細(xì)胞，采用MTT法檢測HGF蛋白的生物學(xué)活性。
　　結(jié)果：
　　成功構(gòu)建了pGAPZαA-HGF穿梭質(zhì)粒，Western Blot檢測顯示80kDa左右有陽性條帶，HGF蛋白成功表達，在48h時表達量較好，濃度為16.6mg/

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