神經(jīng)生長因子在肝細胞肝癌中的表達與復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的關(guān)系研究.pdf

1、目的:檢測不同肝組織標(biāo)本及不同轉(zhuǎn)移潛能人肝癌細胞系中神經(jīng)生長因子(nerve growth factor,NGF)的表達,同時檢測血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factot,VEGF)、E-鈣粘蛋白(E-cadherin,E-CD)在不同肝組織標(biāo)本中的表達,討論NGF、VEGF、E-CD之間的相互關(guān)系及其與肝細胞肝癌(human hepatotellular careinoma,HCC,簡稱肝

2、癌)患者臨床病理特征及總生存期的關(guān)系,尋求在分子水平對肝癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移早期診斷治療更新、更有效的方法。
　　 方法:應(yīng)用免疫組織化學(xué)S-P染色法分別檢測NGF、VEGF、E-CD在45例肝癌組織和對應(yīng)的癌旁硬化肝組織,以及15例肝血管瘤旁肝組織(對照組)中的表達情況。采用流式細胞術(shù)(flow cytometry,FCM)測定NGF蛋白在SMMC-7721、HepG2細胞株中的表達情況。隨訪患者總生存時間。將實驗結(jié)果與肝癌患者臨床病理

3、資料(性別、年齡、腫瘤直徑、AFP、HBsAg、HBeAb、臨床分期、病理分級、侵襲性分組)及生存情況進行匯總,探討各蛋白間的相互關(guān)系及其與肝癌患者臨床病理資料及患者總生存時間之間的相互關(guān)系。
　　 結(jié)果:
　　 1.肝癌組織中NGF、VEGF、E-CD表達水平與癌旁硬化肝組織及肝血管瘤旁肝組織比較:免疫組化結(jié)果顯示NGF、VEGF、E-CD在各組肝組織均有陽性表達,表現(xiàn)為細胞漿、胞膜黃染。NGF在肝癌中的陽性表達率為6

4、8.9％(31/45),顯著高于癌旁硬化肝組織的陽性表達率33.3％(15/45)(Z=-4.249,P=0.000＜0.05)及肝血管瘤旁肝組織的陽性表達率13.3％(2/15)(Z=-3.889,P=-0.000＜0.05),癌旁硬化肝組織與肝血管瘤旁肝組織相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義(Z=-1.586,P=0.113＞0.05)。VEGF在肝癌中的陽性表達率為77.8％(35/45),顯著高于癌旁硬化肝組織的陽性表達率37.8％(17/4

5、5)(Z=-5.297,P=0.000＜0.05)及肝血管瘤旁肝組織的陽性表達率60.0％(9/15)(Z=-3.281,P=0.000＜0.05),癌旁硬化肝組織與肝血管瘤旁肝組織相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義(Z=-1.297,P=0.194)0.05)。E-CD在肝癌中的陽性表達率為40.0％(18/45),其表達顯著低于癌旁硬化肝組織的陽性表達率88.9％(40/45)(Z=-5.504,P=0.000＜0.05)及肝血管瘤旁肝組織的陽性

6、表達率93.3％(14/15)(Z=-4.753,P=0.000(0.05),癌旁硬化肝組織與肝血管瘤旁肝組織比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(Z=-1.305,P=0.192＞0.05)。
　　 2.肝癌組織中NGF、VEGF、E-CD表達水平之間的相互關(guān)系:統(tǒng)計學(xué)分析顯示肝癌組織中NGF的表達水平與VEGF的表達水平呈等級正相關(guān)(rs=0.482,P=0.001＜0.05),NGF的表達水平與E-CD的表達水平呈等級負相關(guān)(rs=-0.

7、467,P=0.001(0.05),VEGF的表達水平與E-CD的表達水平呈等級負相關(guān)(rs=-0.509,P=0.000＜0.05)。
　　 3.肝癌組織中NGF、VEGF、E-CD表達水平與肝癌患者臨床病理特征之間的關(guān)系:統(tǒng)計結(jié)果顯示:NGF在臨床分期較晚、低分化、高侵襲組肝癌癌組織的表達高于臨床分期較早(x2=11.463,P=0.022＜0.05)、高分化(X2=12.730,P=0.002＜0.05)、低侵襲組(2=-

8、2.267,P=0.023＜0.05)者,且與肝癌患者臨床分期(rs=0.444,P=0.002(0.05)、病理分級(rs=0.529,P=0.000＜0.05)、術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移風(fēng)險(rs=0.342,P=0.022＜0.05)呈等級正相關(guān);VEGF在臨床分期較晚、低分化、高侵襲組肝癌癌組織的表達高于臨床分期較早(x2=14.858,P=0.005(0.05)、高分化(x2=6.579,P=0.037＜0.05)、低侵襲組(Z=-1.9

9、87,P=0.047＜0.05)者,且與肝癌患者臨床分期(rs=0.570,P=0.000＜0.05)、病理分級(rs=0.366,P=0.011＜0.05)、術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移風(fēng)險(rs=0.300,P=0.046＜0.05)呈等級正相關(guān);E-CD在臨床分期較早、高分化、低侵襲組肝癌癌組織的表達高于臨床分期較晚(x2=9.577,P=0.048＜0.05)、低分化(X2=23.139,P=0.000＜0.05)、高侵襲組(Z=-2.134,

10、P=0.033＜0.05)者,且其表達與肝癌患者臨床分期(rs=-0.382,P=0.010＜0.05)、病理分級(rs=-0.656,P=0.000＜0.05)、術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移風(fēng)險(rs=-0.322,P=0.031＜0.05)呈等級負相關(guān);NGF、VEGF、E-CD在肝癌癌組織的表達與患者性別、年齡、腫瘤直徑、AFP、HBsAg、HBeAb均無關(guān)(P＞0.05)。
　　 4.不同轉(zhuǎn)移潛能細胞株中NGF表達水平的比較:流式細胞術(shù)

11、結(jié)果顯示NGF蛋白在高轉(zhuǎn)移潛能人肝癌細胞株SMMC-7721表達的熒光指數(shù)(FI)為0.609±0.071,高于在無轉(zhuǎn)移潛能人肝癌細胞株HepG2表達的熒光指數(shù)0.537±0.092,二者相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.030＜0.05)。
　　 5.生存分析:全組45例患者均獲隨訪,隨訪時間1.5、31.0月,平均生存時間22.1±1.6月,總生存期超過1年者32例,1年生存率為71.1％(32/45)。NGF在肝癌組織中表達(

12、-)和(+～+++)者總生存率分別為78.6％(11/14)和45.2％(14/31),平均生存時間分別為28.1±1.0月和19.1±2.0月(P＜0.05);VEGF在肝癌組織中表達(-)和(+～+++)者總生存率分別為90.0％(9/10)和45.7％(16/35),平均生存時間分別為30.3±0.7月和19.8±1.9月(P＜0.05);E-CD在肝癌組織中表達(-)和(+～+++)者總生存率分別為37.0％(10/27)和83

13、.3％(15/18),平均生存時間分別為17.7±2.1月和28.8±1.2月(P＜0.01)。單因素分析顯示,NGF、VEGF表達陰性、E-CD表達陽性者生存率較高(Log rank檢驗,P均＜0.05);患者年齡、性別、腫瘤直徑、HBsAg陰陽性、HBeAb陰陽性對肝癌患者總生存時間的影響差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P均＞0.05),而臨床分期較早、病理分化較好、血清AFP＜400μ g/L、低侵襲組者較臨床分期較晚、病理分化較差、血清.AF

14、P≥400μ g/L、高侵襲組者生存率較高(Logrank檢驗,P均＜0.05)。多因素COX風(fēng)險模型分析結(jié)果顯示,僅NGF(RR=7.797,P=0.006＜0.05)、VEGF(RR=8.108,P=0.042＜0.05)的表達水平及腫瘤侵襲性(RR=5.434,P=0.003＜0.05)是影響肝癌患者生存期的獨立因素。
　　 結(jié)論:
　　 1.NGF、VEGF在肝癌組織中的表達較癌旁硬化肝組織及肝血管瘤旁肝組織顯著

15、升高,臨床分期越晚、分化越差、侵襲性越高者NGF、VEGF陽性表達越強,總生存時間越短,預(yù)后越差。
　　 2.E-CD在肝癌組織中的表達較癌旁硬化肝組織及肝血管瘤旁肝組織顯著降低,臨床分期越晚、分化越差、侵襲性越高者E-CD陽性表達的表達下調(diào)或缺失,總生存時間越短,預(yù)后越差。
　　 3.臨床分期、病理分級、侵襲性及AFP水平對肝癌患者總生存時間的影響有顯著性差異,臨床分期較早、病理分化較好、AFP較低且屬于低侵襲組患者,

16、生存率較高,總生存時間較長,預(yù)后較好。
　　 4.肝癌組織中NGF的表達與肝癌轉(zhuǎn)移指標(biāo)VEGF的表達呈等級正相關(guān),與另一轉(zhuǎn)移指標(biāo)E-CD的表達呈等級負相關(guān),提示NGF在肝癌的發(fā)生、發(fā)展中起著極其重要的作用,與肝癌的復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移等惡性生物學(xué)行為密切相關(guān),NGF與臨床病理資料聯(lián)合可有效預(yù)測肝癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移風(fēng)險,為臨床上對高復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移風(fēng)險的肝癌患者采取有效的預(yù)防性干預(yù)措施,減少或阻止術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移提供了理論依據(jù),有望成為肝癌治療及評估預(yù)后的靶點。