新的肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子—HPPCn的分離純化及其生物學(xué)活性的研究.pdf

1、我國(guó)是一個(gè)肝病大國(guó)，隨著科技經(jīng)濟(jì)的飛速發(fā)展，人們的生活節(jié)奏加快，人們的健康也頻頻亮起紅燈，肝炎、肝硬化與肝癌的發(fā)病率越來(lái)越高，對(duì)社會(huì)危害嚴(yán)重。因而深入研究肝損傷與再生的分子生物學(xué)機(jī)制，開(kāi)發(fā)治療肝病新藥,意義重大。新的肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子HPPCn就是在此背景下誕生的一種具有特異性的促肝癌細(xì)胞系增殪活性的單體。 本研究的主要目的是對(duì)HPPCn重組表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行純化并對(duì)純化產(chǎn)物進(jìn)行體內(nèi)功能學(xué)研究。根據(jù)HPPCn的分子量、等電點(diǎn)等特性，采用兩

2、步陰離子交換層析法純化蛋白，考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定蛋白濃度，HPLC和凝膠掃描分析其純度，Western blot法分析其免疫原性，MALDI-TOF測(cè)定其分子量。結(jié)果，采用兩步陰離子交換層析純化的蛋白純度達(dá)94％，純化總得率為8.5％，蛋白總量和純度均達(dá)體內(nèi)外活性研究的要求。 采用MTT法和<'3>H-TdR DNA摻入法檢測(cè)純化的HPPCn對(duì)肝癌細(xì)胞系SMMC 7721的促增殖活性及其劑量關(guān)系；通過(guò)鼠肝原位灌流法分離培養(yǎng)大鼠原代

3、肝細(xì)胞，<'3>H-TdR DNA摻入法檢濺HPPCn對(duì)原代培養(yǎng)大鼠肝紐胞的促增殖作用，進(jìn)一步驗(yàn)證HPPCn的體外促肝細(xì)胞增殖活性。結(jié)果表明, 純化HPPCn能顯著促進(jìn)SMMC7721和原代培養(yǎng)大鼠肝細(xì)胞的增殖并有一定的劑量依賴性。 體內(nèi)活性研究中，首先采用經(jīng)典的部分肝切除模型，檢測(cè)殘肝中 HPPCn表達(dá)量的時(shí)間動(dòng)態(tài)變化，結(jié)果表明HPPCn與肝再生密切相關(guān); 建立CCl<,4>和ConA致小鼠急性肝損傷模型以及CCl<,4>復(fù)