pDC功能及TLR9表達(dá)在慢性乙型肝炎發(fā)病機(jī)制及抗病毒療效中作用的研究.pdf

1、背景與目的： HBV持續(xù)感染可能與病毒、宿主等因素有關(guān)，機(jī)體免疫反應(yīng)不足可能是HBV感染后疾病慢性化的主要原因。漿樣樹突狀細(xì)胞(pDC)是機(jī)體內(nèi)源性I型IFN產(chǎn)生的主要細(xì)胞，它們是人體天然免疫應(yīng)答的重要組成部分。Toll樣受體9(TLR9)是新近發(fā)現(xiàn)的一種模式識(shí)別受體，pDC依靠TLR9識(shí)別各種病毒核酸CpG基序而被活化，繼而分泌大量干擾素(IFN)。pDC不僅是聯(lián)系病毒抗原和T細(xì)胞之間的紐帶，而且也是天然免疫和特異性免疫之間

2、的橋梁。除特異性免疫應(yīng)答外，宿主抗HBV的天然免疫應(yīng)答(特別是以pDC為主的天然免疫應(yīng)答)可能決定著HBV感染的臨床結(jié)局和預(yù)后。本文對(duì)pDC數(shù)量和功能及TLR9表達(dá)在慢性乙型肝炎療效及機(jī)制中的研究，對(duì)于闡明乙型肝炎慢性化機(jī)制，尋找治療慢性乙型肝炎更為有效的方法具有重要意義。 方法： 1.流式細(xì)胞分析技術(shù)檢測(cè)69例慢性HBV感染患者(包括HBV攜帶者14例，慢性乙型肝炎患者30例，乙型肝炎肝硬化患者25例)和21例健康對(duì)照

3、組外周血pDC頻率和TLR9表達(dá)水平；用CpG ODN2216刺激外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)并與PBMC共培養(yǎng)24 h，檢測(cè)上清液中pDC產(chǎn)生。IFN-α的能力；分析pDC數(shù)量、分泌IFN-α功能變化及其臨床意義。免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)pDC胞漿HBsAg和HBcAg。 2.慢性乙型肝炎患者隨機(jī)分為兩組(A，B組)。其中A組接受長(zhǎng)效干擾素(派羅欣180ug)每周皮下注射一次治療48周；B組先單用長(zhǎng)效干擾素(派羅欣180ug)治療

4、12周，再加用恩替卡韋0.5mg/d口服治療12周，然后單用長(zhǎng)效干擾素治療24周。治療過(guò)程中觀察肝功能、乙肝病毒學(xué)標(biāo)志、HBV DNA等指標(biāo)，檢測(cè)外周血pDC數(shù)量和功能及TLR9表達(dá)水平，血清TNF-α及IFN-γ水平等指標(biāo)。 3.采用標(biāo)簽SNP(tag SNP)的方法，對(duì)209例不同臨床表型的慢性HBV感染人群中TLR9基因多態(tài)性進(jìn)行分析。 結(jié)果： 1.與健康對(duì)照組相比，HBV攜帶者、慢性乙型肝炎、乙型肝炎肝硬

5、化患者pDC表達(dá)TLR9平均熒光強(qiáng)度均有不同程度下降(p<0.05)。與慢性乙型肝炎患者比較，HBV攜帶者及乙型肝炎肝硬化患者gDC表達(dá)TLR9平均熒光強(qiáng)度降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。健康對(duì)照組外周血pDC細(xì)胞含量明顯高于慢性乙型肝炎和乙型肝炎肝硬化患者(p<0.05)。慢性HBV感染患者外周血pDC頻率與血清ALT水平呈明顯負(fù)相關(guān)(r=-0.341，p<0.05)。HBV攜帶者、慢性乙型肝炎患者、乙型肝炎肝硬化患者PBMC

6、中pDC分泌IFN-α的水平明顯低于健康人PBMC中pDC分泌IFN-α的水平(p<0.05)。pDC中有HBsAg和HBcAg表達(dá)，pDC功能受損可能與pDC感染HBV有關(guān)。 2.聯(lián)合治療組HBeAg定量在治療24周、36周、48周時(shí)比單一用藥組顯著下降。有效組與無(wú)效組TLR9平均熒光強(qiáng)度，pDC數(shù)量及IFN-α分泌能力在治療2周時(shí)均明顯下降，有效組12周時(shí)TLR9平均熒光強(qiáng)度，pDC數(shù)量及IFN-α分泌能力顯著恢復(fù)，無(wú)效組則

7、沒(méi)有觀察到這一現(xiàn)象。治療36周時(shí)，有效組血清TNF-α，IFN-γ水平顯著升高，與無(wú)效組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)?；€水平時(shí)，有效組IFN-γ水平明顯高于無(wú)效組(p=0.018)。 3.①肝炎肝硬化組CC基因型頻率顯著高于健康對(duì)照組(p<0.05)；②C等位基因頻率亦顯著高于健康對(duì)照組(p<0.05)。 結(jié)論： 1.慢性乙型肝炎患者外周血漿樣樹突狀細(xì)胞TLR9表達(dá)有不同程度下降。pDC是I型干擾素的

8、主要來(lái)源，并且慢性乙型肝炎患者pDC分泌IFN-α能力顯著低于正常人，提示慢性乙型肝炎患者pDC功能受損，并可能是乙肝病毒不能被免疫清除、導(dǎo)致病毒持續(xù)存在、疾病慢性化的原因之一。 2.pDC中有HBsAg和HBcAg表達(dá)，pDC功能受損可能與其感染HBV有關(guān)。 3.pDC在IFN-α治療誘發(fā)的早期免疫應(yīng)答中發(fā)揮重要作用，抗病毒治療過(guò)程中pDC數(shù)量和功能的恢復(fù)是機(jī)體抗病毒應(yīng)答的重要因素。 4.TLR9基因可能為乙型