慢性乙型肝炎患者抗病毒治療療效相關(guān)的遺傳因素研究.pdf

1、背景：
　　慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染后的經(jīng)典三步曲即慢性乙型肝炎(CHB)、肝硬化和原發(fā)性肝癌?？共《臼锹砸倚透窝椎闹饕委煼椒?包括干擾素(IFN-α)和核苷(酸)類似物,以清除病毒、延遲肝硬化、肝癌的進(jìn)展以及提高生存率為長期治療目標(biāo)。長期以來,肝功能、乙肝五項(xiàng)和乙型肝炎病毒載量(HBVDNA)等實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)一直是評(píng)估乙肝患者病情的經(jīng)典標(biāo)志。隨著科技的進(jìn)步,許多與CHB患者抗病毒療效相關(guān)的遺傳背景標(biāo)志物開始出現(xiàn)。本課題組前

2、期采用前瞻性研究發(fā)現(xiàn)雌激素受體1(ESR1)單核苷酸多態(tài)性(SNP)與IFN-α初治患者早期病毒學(xué)應(yīng)答相關(guān)。除了本課題組之外,尚無關(guān)于ESR1SNP與CHB患者抗病毒療效的相關(guān)性研究,因此,本研究在擴(kuò)大樣本量、延長隨訪時(shí)間以及增加相關(guān)SNPs的基礎(chǔ)上進(jìn)一步分析基因單核苷酸多態(tài)性、基因mRNA表達(dá)水平以及干擾素抗病毒療效之間的相關(guān)性,IFN-α和恩替卡韋(ETV)均因療效好耐藥率低而被視為CHB初治患者的一線用藥,我們對(duì)ESR1SNP與恩

3、替卡韋抗病毒治療的可能相關(guān)性也進(jìn)行了分析,以期為CHB患者干擾素和恩替卡韋抗病毒治療提供新的預(yù)測因素。
　　目的：
　　以IFN-α和ETV初始抗病毒治療的CHB患者為研究對(duì)象,選取了3條基因(ESR1、MxA和eIF-2α)和7個(gè)SNP(rs2077647、rs9340799、rs2234693、rs322354、rs2071430、rs3759755以及rs3759756),對(duì)CHB患者抗病毒治療(IFN-α和ETV)療

4、效與宿主基線特征、基因單核苷酸多態(tài)性以及基因mRNA表達(dá)水平的相關(guān)性進(jìn)行了探討。
　　方法：
　　本課題共收集了248例初始抗病毒治療的CHB患者,包括172例使用IFN-α抗病毒治療的HBeAg陽性患者和76例使用ETV抗病毒治療的HBeAg陽性或陰性的患者。我們對(duì)患者抗病毒治療第4周、12周、24周、48周、72周以及96周的病毒學(xué)應(yīng)答進(jìn)行評(píng)估,采用QIAGENDNA抽提試劑盒對(duì)所有病例進(jìn)行了基因組DNA的提取,綜合使用

5、限制性片段長度多態(tài)性(PCR-RFLP)及質(zhì)譜分析的方法對(duì)ESR1rs2077647、rs9340799、rs2234693和rs322354,eIF-2αrs3759755和rs3759756以及MxArs2071430進(jìn)行了基因型分型,采用熒光染料實(shí)時(shí)定量(SYBRGreenRT-PCR)法檢測了103例IFN-α抗病毒治療患者治療前、中、后各時(shí)間點(diǎn)外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMCs)中的3條基因(ESR1、eIF-2α和MxA)mRNA

6、的表達(dá)水平以及采用凝膠移動(dòng)抑制分析(EMSA)實(shí)驗(yàn)檢測了eIF-2α基因rs3759755不同等位的核蛋白結(jié)合能力。采用SPSS13.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)資料進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
　　結(jié)果：
　　1.通過多因素分析,我們發(fā)現(xiàn)基線HBVDNA水平與IFN-α快速病毒學(xué)應(yīng)答(OR=1.718,95％CI:1.184-2.492,P=0.004)和早期病毒學(xué)應(yīng)答(OR=1.457,95%CI:1.008-2.107,P=0.045)均有顯著相關(guān)

7、性,且發(fā)生快速病毒學(xué)應(yīng)答(RVR)的患者更易發(fā)生早期病毒學(xué)應(yīng)答(OR=9.123,95%CI:3.507-23.735,P<0.001);接受IFN-α治療的患者中基線HBsAg水平(OR:1.000,95%CI:1.000-1.000,P=0.018)、基線HBeAg水平≤200S/CO(OR:0.009,95%CI:0.001-0.077,P<0.001)、12周HBeAg≤10S/CO(OR:0.196,95%CI:0.069-0

8、.560,P=0.002)以及早期病毒學(xué)應(yīng)答(OR:0.101,95%CI:0.022-0.470,P=0.003)與72周病毒學(xué)應(yīng)答均有顯著相關(guān)性?；€HBVDNA水平對(duì)恩替卡韋24周、48周病毒學(xué)應(yīng)答有重要的預(yù)測意義(P<0.05)。
　　2.我們?cè)?72例IFN-α初治HBeAg陽性CHB患者中對(duì)3條基因上的7個(gè)SNPs進(jìn)行了分型(ESR1基因的rs2077647、rs9340799、rs2234693和rs322354;M

9、xA基因的rs2071430;eIF-2α基因的rs3759755和rs3759756),結(jié)果發(fā)現(xiàn)早期病毒學(xué)應(yīng)答率在rs2077647TT、TC和CC基因型組間存在顯著差異(?2=6.240,P=0.044),且攜帶至少一個(gè)rs2077647T等位基因的患者早期病毒學(xué)無應(yīng)答率顯著高于CC基因型(TT+TCvs.CC,?2=6.189,P=0.013),但在校正基線ALT、基線HBVDNA以及RVR之后差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(分別為OR:0.

10、727,95%CI:0.279-1.889,P=0.512和OR:1.585,95%CI:0.277-9.060,P=0.604);我們的單因素分析結(jié)果還顯示72周病毒學(xué)應(yīng)答率在rs2234693TT、TC和CC基因型組中存在顯著差異(?2=6.478,P=0.039),且攜帶至少一個(gè)rs2234693C等位基因的患者72周病毒學(xué)應(yīng)答率顯著高于CC基因型(66.4%vs.46.4%,?2=6.258,P=0.012);rs2071430

11、GG、GT和TT基因型組間的72周病毒學(xué)應(yīng)答率也存在顯著差異(?2=8.079,P=0.018),攜帶TT基因型患者72周病毒學(xué)無應(yīng)答率顯著高于至少攜帶至少一個(gè)C等位基因的患者(66.6%vs.37.0%,?2=5.899,P=0.015);rs3759756AG基因型組中的72周病毒學(xué)無應(yīng)答率明顯高于AA基因型(77.3%vs.34.7%,?2=14.498,P<0.001),但在校正基線HBsAg水平、基線HBeAg水平、12周HB

12、eAg水平、RVR及EVR之后,只有eIF-2α基因上的rs3759756與IFN-α72周病毒學(xué)應(yīng)答顯著相關(guān)(OR=37.988,95%CI:1.665-86.6737,P=0.023),提示攜帶rs3759756AG基因型的患者在72周發(fā)生病毒學(xué)無應(yīng)答的幾率遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于AA基因型患者。
　　3.我們?cè)?6例恩替卡韋初治的CHB患者中檢測了ESR1基因上的2個(gè)SNPs(rs2234693和rs9340799),單因素分析結(jié)果顯示48

13、周、96病毒學(xué)應(yīng)答率在rs2234693TT、TC和CC基因型組間均存在顯著性差異(分別為57.1%vs.87.8%vs.58.3%,P=0.012和64.3%vs.96.7%vs.87.5%,P=0.018),在校正了基線TBIL水平后發(fā)現(xiàn),至少攜帶一個(gè)rs2234693C等位基因的患者48周、96周病毒學(xué)應(yīng)答率均明顯高于TT基因型患者(分別為81.1%vs.57.1%,95%CI:1.026-14.785,P=0.046和94.7%

14、vs.64.3%,95%CI:1.456-57.509,P=0.018)。
　　4.通過檢測103例接受FN-α治療的HBeAg陽性ICHB患者中的ESR1、MxA和eIF-2α基因在IFN-α治療前、中及治療后個(gè)時(shí)間點(diǎn)mRNA的表達(dá)水平,發(fā)現(xiàn)女性患者72周病毒學(xué)應(yīng)答組的基線ESR1mRNA水平顯著高于無應(yīng)答組(9.2722±6.448vs.6.041±6.738,Z=-0.207,P=0.038),且基線ESR1RNA表達(dá)水平與

15、基線HBVDNA呈負(fù)相關(guān)(r=-0.750,P<0.001)。男性患者隨訪至72周時(shí),病毒學(xué)應(yīng)答組的ESR1mRNA水平顯著高于無應(yīng)答組(21.838±39.775vs.1.929±1.174,Z=-2.162,P=0.031)。MxA和eIF-2α基因的mRNA表達(dá)水平在IFN-α治療前后均無顯著變化(P>0.05)。
　　5.攜帶eIF-2αrs3759756AG基因型的CHB患者中IFN-α72周病毒學(xué)無應(yīng)答率顯著高于AA基

16、因型患者,凝膠移動(dòng)抑制分析(EMSA)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)rs3759756A、G特異性等位位點(diǎn)存在核蛋白結(jié)合差異,且A等位與核蛋白的結(jié)合量約為G等位的3倍,AA和AG基因型患者中eIF-2αmRNA表達(dá)水平的差異可能與此有關(guān)。
　　結(jié)論：
　　1.基線HBVDNA水平和ESR1rs2234693對(duì)恩替卡韋的病毒學(xué)應(yīng)答均有重要的預(yù)測意義。
　　2.在IFN-α初治的HBeAg陽性CHB患者中,基線HBVDNA水平和RVR對(duì)快速和早

17、期病毒學(xué)應(yīng)答均有預(yù)測意義;基線HBsAg水平、HBeAg水平≤200S/CO、12周HBeAg水平≤10S/CO、EVR以及eIF-2αrs3759756對(duì)72周病毒學(xué)應(yīng)答有重要的預(yù)測意義;女性患者中,治療前PBMCESR1mRNA表達(dá)水平對(duì)72周病毒學(xué)應(yīng)答有預(yù)測意義,且與基線HBVDNA水平負(fù)相關(guān);干擾素能顯著增加72周病毒學(xué)應(yīng)答男性患者中ESR1mRNA的表達(dá)水平。
　　3.EIF-2αmRNA表達(dá)水平與IFN-α病毒學(xué)應(yīng)答無