核苷(酸)類似物抗病毒治療的病毒免疫動力學及其對療效的影響.pdf

1、研究目的：
　　 1.動態(tài)觀察阿德福韋酯治療HBeAg陽性的慢性乙型病毒性肝炎患者,伴隨病毒下降的過程,外周血特異性(HBV特異性CD4+T細胞功能)和非特異性免疫細胞(Treg細胞以及NK細胞受體NKG2D表達)的改變,與HBeAg血清學應答的相關(guān)性。進一步探討病毒動力學下降對宿主免疫功能的影響及抗病毒治療的病毒免疫學機制。
　　 2.比較抗病毒治療的病毒動力學早期階段(0-12周),肝臟局部病毒的清除動力學和肝組織免

2、疫細胞的改變,對HBeAg血清學轉(zhuǎn)換的影響。進一步探討肝臟局部抗病毒治療的病毒免疫學機制。
　　 研究方法：
　　 入選13例HBeAg陽性CHB初治患者,所有患者均予阿德福韋酯治療10mg/天,隨訪治療1年。在治療前、治療后2周、4周、8周、12周、16周、20周、24周、36周、48周留取肝素抗凝全血作為隨訪檢測標本,部分全血分離外周血單核細胞凍存,分批進行檢測。其中8例患者治療前和治療后12周各行肝活檢一次,留取肝

3、組織樣本進行檢測。
　　 1.監(jiān)測抗病毒治療過程血清HBV-DNA、HBeAg、HBsAg的水平,BrdU淋巴細胞增殖試驗檢測相應隨訪時間點的T細胞增殖率,酶聯(lián)免疫斑點試驗檢測分泌干擾素-γ的HBV特異性CD4+T細胞頻數(shù),以評價抗病毒治療后病毒的下降對HBV特異性T細胞功能的影響。
　　 2.多色流式細胞術(shù)檢測抗病毒治療過程,CD4+CD25+Treg細胞數(shù)量和NK細胞活化受體NKG2D的表達。
　　 3.實時

4、熒光定量PCR檢測治療前和治療后12周肝臟組織病毒(cccDNA、HBVDNA)載量,比較治療前后肝臟組織病毒載量的動態(tài)改變。
　　 4.免疫組化法分析治療前和治療后12周肝臟組織免疫細胞(CD4+T細胞、CD8+T細胞和NK細胞)和細胞因子干擾素-γ的動態(tài)表達。
　　 結(jié)果：
　　 1.阿德福韋酯治療48周時,13例患者有9例HBVDNA陰轉(zhuǎn)(9/13,69％)；4例出現(xiàn)HBeAg的陰轉(zhuǎn)(4/13,30％),其

5、中2例出現(xiàn)Anti-HBe(2/13,15％)。治療36周和48周時,HBeAg陰轉(zhuǎn)的患者血清HBVDNA下降較未陰轉(zhuǎn)的顯著(P<0.05)。
　　 2.伴隨病毒載量的下降,HBeAg陰轉(zhuǎn)組治療后HBV抗原特異性CD4+T細胞應答較治療前增強,分別在治療12周和出現(xiàn)HBeAg陰轉(zhuǎn)時達到峰值(P<0.05),而HBeAg未陰轉(zhuǎn)組治療后較治療前無顯著增強。與HBeAg未陰轉(zhuǎn)組比較,在治療前和治療后各隨訪點,HBeAg陰轉(zhuǎn)組HBV抗原

6、特異性CD4+T細胞應答都較前者顯著增強(P<0.05)。HBeAg陰轉(zhuǎn)組治療后HBV抗原特異性T細胞增殖能力一過性增強,而HBeAg未陰轉(zhuǎn)組無T細胞增殖應答。表明病毒載量下降后,部分患者出現(xiàn)HBV特異性T細胞應答功能的增強,并實現(xiàn)了HBeAg血清學應答。
　　 3.伴隨血清HBV-DNA的下降,Treg的數(shù)量逐漸下降,4周后趨于穩(wěn)態(tài)；而NK細胞活化受體NKG2D在治療后8周開始上升,48周時達到峰值(P=0.000)。HBV-

7、DNA和Keg之間呈正相關(guān)性趨勢(r=0.808,P=0.000),與NKG2D間呈負性相關(guān)趨勢(r=-0.734,P=0.000)；Treg的數(shù)量和NKG2D的表達趨勢和升降幅度在HBeAg轉(zhuǎn)換組和HBeAg未轉(zhuǎn)換組間沒有顯著差異。
　　 4.ADV治療12周后肝組織總HBVDNA平均下降1.52log10,肝組織cccDNA下降1.92log10；近98％左右的肝臟病毒量在治療的早期被清除。同步比較外周血HBVDNA平均降低

8、99.72％,肝臟局部和外周血病毒的清除動力學相一致。
　　 5.治療前HBeAg陰轉(zhuǎn)組的肝組織HBV DNA和cccDNA水平低于HBeAg未陰轉(zhuǎn)組。同時,治療12周時HBeAg陰轉(zhuǎn)組的cccDNA水平低于HBeAg未陰轉(zhuǎn)組。
　　 6.有4例患者治療12周后肝組織CD8+T細胞和NK細胞的平均陽性面積和匯管區(qū)陽性細胞數(shù)較治療前增加,其中3例是HBeAg陰轉(zhuǎn)的患者,僅1例是HBeAg未陰轉(zhuǎn)患者。這提示治療后肝組織免疫效

9、應細胞的增加,可促使抗病毒免疫功能的恢復,有利于HBeAg的轉(zhuǎn)換。
　　 結(jié)論：
　　 1.阿德福韋酯抗病毒治療的病毒動力學,早期是藥物的抑制作用,后期免疫功能的恢復促使病毒的進一步清除。外周血與肝臟的病毒清除動力學是一致的。36周血清HBVDNA陰轉(zhuǎn)與HBeAg轉(zhuǎn)換密切相關(guān),是阿德福韋酯治療CHB患者HBeAg血清學轉(zhuǎn)換的預測因素。
　　 2.阿德福韋酯抗病毒治療過程,病毒負荷下降,外周血和肝臟局部特異性和非特