HuR與NF-kB蛋白在胃癌及其癌前病變組織中表達的關(guān)系及意義.pdf

1、目的:檢測一種重要mRNA結(jié)合蛋白家族Hu Family(又名ELAVL家族)中唯一在人類各種組織廣泛表達的成員HuR(ELAVL1)在正常胃黏膜、癌前病變及胃癌組織中的表達及定位,分析HuR和NF-κB在胃癌組織中表達的相關(guān)性,探討HuR與胃癌臨床病理因素的關(guān)系以及兩者在胃癌發(fā)生發(fā)展和預后中的作用及意義。
　　 方法:臨床病理資料及組織芯片制作:收集中國醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院外科手術(shù)切除胃癌組織237例,其中187例為同時收集距

2、癌灶邊緣大于5 cm處正常胃黏膜作為對照以及慢性萎縮性胃炎54例,腸上皮化生84例及異型增生25例。常規(guī)組織蠟塊行4μm組織切片,常規(guī)HE染色,用于目標組織的定位。免疫組化染色及判定方法:采用PV9000免疫組化二步法檢測胃癌及癌前病變中HuR和NF-κB的表達。鼠抗人HuR單克隆抗體(工作濃度為1:500)和兔抗人NF-κB多克隆抗體(工作濃度為1:600)均購自美國Santa Cruze公司,PV9000免疫組化檢測試劑盒和氨基聯(lián)苯

3、胺(DAB)顯色試劑盒購自北京中杉生物有限公司。采用組織芯片制作儀構(gòu)建胃癌及癌前病變組織芯片蠟塊,行4μm連續(xù)切片。采用檸檬酸修復液(pH6.0)高溫高壓修復抗原,PBS替代一抗做陰性對照。結(jié)果判定方法:HuR蛋白陽性反應為棕黃色顆粒定位于細胞漿和細胞核,NF-κB蛋白陽性反應為棕黃色顆粒主要在細胞漿,少數(shù)在細胞核。每個病例由兩位觀察者采用盲法隨機選擇2個高倍視野,計數(shù)200個細胞,染色強度(A)以陽性細胞呈色反應為準:無特異性著色為0

4、分,淺棕色為1分,棕黃色為2分,深棕色為3分:染色的陽性細胞所占比例(B)按下列標準評定記分:陰性細胞或陽性細胞＜5％為0分,陽性細胞占5～25％為1分,陽性細胞占26％～50％為2分,陽性細胞51％～75％為3分,陽性細胞＞75％為4分。兩種評分相乘(A×B),將結(jié)果分為:0分為陰性(-);1～4分為弱陽性(+);5～8分為中度陽性(++);9～12分為強陽性(+++),0～4分為陰性,5～12分為陽性。
　　 結(jié)果:HuR蛋

5、白在細胞漿中的表達從慢性萎縮性胃炎(8/54,14.81％)、腸上皮化生(35/84,41.67％)、異型增生(11/25,44.00％)到胃癌(111/237,46.84％)的陽性表達率逐漸升高,并均顯著高于正常胃黏膜(2/187,1.14％);HuR在腸上皮化生和異型增生與胃癌以及腸上皮化生與異型增生的陽性表達比較未見顯著統(tǒng)計學差異。HuR蛋白在腸上皮化生(35/84,41.67％),異型增生(11/25,44.00％)和在胃癌(1

6、11/237,46.84％)的表達高于在慢性萎縮性胃炎(8/54,14.81％)的陽性表達。HuR蛋白在胞漿的陽性表達率在大體分型中BorrmannⅢ+Ⅳ(99/193,,51.30％)高于BorrmannⅠ+Ⅱ(13/44,29.55％)中的表達。腫塊的最大直徑大于5 cm組(60/95,63.16％)的陽性表達率高于最大直徑小于5 cm組(36/81,44.44％)。關(guān)于胃癌細胞的分化程度,HuR蛋白在高中分化組(45/83,54.

7、22％)高于在低分化組(43/118,36.44％)的陽性表達率。按照TNM分期中淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移分期的劃分,HuR蛋白在胃癌細胞胞漿陽性表達率在N1(40/103,38.83％),N2(34/57,59.65),N3(12/18,66.67)逐漸增高。HuR蛋白在遠處轉(zhuǎn)移組(45/79,56.96％)顯著高于無遠處轉(zhuǎn)移組(66/158,41.77％)。但是,HuR在細胞漿中的表達與患者的年齡、性別、Lauren分型、浸潤深度、淋巴結(jié)有無轉(zhuǎn)移

8、、無顯著關(guān)聯(lián)。
　　 HuR蛋白在細胞核中的表達從腸上皮化生(42/84,50.00％)、異型增生(13/25,52.00％)到胃癌(130/237,54.85％)的陽性表達率均顯著高于正常胃黏膜(48/187,25.67％);HuR蛋白在胃癌(130/237,54.85％)的表達高于在慢性萎縮性胃炎(19/54,35.19％)的陽性表達,而在腸上皮化生(42/84,50.00％)、異型增生(13/25,52.00％)與慢性萎縮

9、性胃炎(19/54,35.19％)的陽性表達未見顯著差異;在正常胃黏膜(48/187,25.67％)與慢性萎縮性胃炎(19/54,35.19％)的陽性表達率未見顯著差異。HuR在腸上皮化生和異型增生與胃癌以及腸上皮化生與異型增生的陽性表達比較未見顯著統(tǒng)計學差異。關(guān)于胃癌大體分型,在BorrmannⅠ+Ⅱ(13/44,29.55％)低于在BorrmannⅢ+Ⅳ中的表達(117/173,60.62％);而HuR在細胞核中的表達與患者的年齡、

10、性別、腫塊大小、細胞分化程度,Lauren分型、浸潤深度、淋巴結(jié)有無轉(zhuǎn)移以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移分期和遠處轉(zhuǎn)移都無顯著關(guān)聯(lián)。
　　 NF-κB從慢性萎縮性胃炎(14/54,25.93％)、腸上皮化生(47/84,55.95％)、異型增生(17/25,68.00％)到胃癌(159/237,67.09％)的陽性表達率均顯著高于正常胃黏膜(6/187,3.21％);HuR在腸上皮化生和異型增生與胃癌以及腸上皮化生與異型增生的陽性表達比較未見顯著

11、統(tǒng)計學差異。NF-κB蛋白在腸上皮化生(47/84,55.95％)、異型增生(17/25,68.00％)和在胃癌(159/237,67.09％)高于在慢性萎縮性胃炎(14/54,25.93％)的陽性表達。BorrmannⅢ+Ⅳ(137/193,74.54％)高于BorrmannⅠ+Ⅱ(22/44,50.00％)中的表達。在Lauren分型中,NF-κB蛋白在的陽性表達強度在腸型胃癌組(64/86,74.42％)高于在彌漫型胃癌組中的表達

12、(79/129,61.24％)。另外,NF-κB蛋白的表達跟淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移個數(shù)相關(guān),按照TMN分期系統(tǒng)中N分級,在N1(60/103,58.25％),N2(46/57,80.70),N3(16/18,88.89)逐漸增高。但是,NF-κB表達與胃癌患者的年齡、性別、腫塊大小,細胞分化程度、浸潤深度、淋巴結(jié)有無轉(zhuǎn)移及遠處轉(zhuǎn)移都無顯著關(guān)聯(lián)。237例胃癌組織中HuR蛋白在細胞漿、細胞核的表達與NF-κB表達均呈正相關(guān)。
　　 有完整隨訪資

13、料的213例患者中,生存101例,死亡112例,總生存率47.42％,中位生存時間為38個月。單因素分析采用Kaplan Meier分析,HuR胞漿陰性和陽性的患者總生存率分別為47.3％和46.5％,平均生存時間分別為35.93±2.26months和30.17±2.09 months,總生存率無明顯差異(P=0.14,log-rank檢驗).HuR胞核陰性和陽性的患者總生存率分別為43.0％和50.0％,平均生存時間分別為35.94

14、±2.30 months和34.77±2.72 months,總生存率無明顯差異(P=0.252,log-rank檢驗)。NF-κB表達陰性和陽性的患者總生存率分別為39.1％和50.7％,平均生存時間分別為34.51±2.60 months和31.86±1.84,總生存率無明顯差異(P=0.827,log-rank檢驗)。采用COX回歸模型(逐步后退法)進行多因素分析可見,患者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移N分期,遠處轉(zhuǎn)移是213胃癌的總生存率的獨立危

15、險因素,與HuR胞漿,胞核及總HuR表達,NF-κB的表達性別,年齡,Borrmann分型等因素無關(guān)。
　　 結(jié)論:與正常胃粘膜相比,在胃癌癌前病變和胃癌組織中存在著HuR胞漿表達和NF-κB蛋白表達的上調(diào),表明兩者可能都參與了胃癌發(fā)生過程;同時,兩者在腸上皮化生顯著上調(diào),且均有腸型胃癌顯著高于彌漫型胃癌的中的表達的趨勢,提示HuR胞漿表達和NF-κ可能與腸分化表型相關(guān)聯(lián),其可能參與了胃黏膜的腸型胃癌的發(fā)生。。雖然HuR胞漿和胞

16、核的表達均與Borrmann分型較高相關(guān),但是HuR胞漿還與腫塊直徑的增大和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移亞組的N分期、遠處轉(zhuǎn)移相關(guān),提示HuR胞漿表達可能參與了胃癌的生長,侵襲和轉(zhuǎn)移,而胞核表達與胃癌其它的生長侵襲和轉(zhuǎn)移的病理因素都不相關(guān)。NF-κB與Borrmann分型和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移亞組的N分期相關(guān),表明NF-κB增強了胃癌細胞的侵襲力和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移程度。
　　 胃癌組織中HuR蛋白在細胞漿和胞核中的表達均與NF-κB表達呈正相關(guān),提示HuR蛋白可