Bmi-1在胃癌及其癌前病變中的表達(dá)及臨床病理意義.pdf

1、Bmi-1(B-cell-specific Moloney murine leukemia virus insertion site1)基因是多梳基因(polycomb group genes，PcG)家族成員中的轉(zhuǎn)錄抑制因子，是公認(rèn)的一種原癌基因。近年來，在人類多種惡性腫瘤中均發(fā)現(xiàn)有Bmi-1蛋白表達(dá)。目前為止，Bmi-1在胃癌中表達(dá)的研究?jī)H有Reinisch等報(bào)道了Bmi-1是一種表達(dá)在胃腸干細(xì)胞、分化細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞的蛋白。胃腺頸部

2、和大腸隱窩部是可能的胃腸干細(xì)胞區(qū)域，藤澤亨等采用免疫熒光雙標(biāo)記的方法觀察Bcl-2+/ki-67-細(xì)胞位于該區(qū)域，因此以Bcl-2+/ki-67-作為可能的胃黏膜干細(xì)胞標(biāo)記。本研究采用免疫組織化學(xué)方法，通過檢測(cè)Bmi-1、Bcl-2和ki-67在正常胃黏膜、腸上皮化生、不典型增生和胃癌中的表達(dá)，分析三者之間的關(guān)系以及Bcl-2+/ki-67-細(xì)胞的分布，并探討其與胃癌臨床病理因素的關(guān)系及意義。 目的： 本研究采用免疫組化

3、方法，通過檢測(cè)Bmi-1，ki-67和Bcl-2在正常胃黏膜、腸化生、不典型增生和胃癌中的表達(dá)，分析Bmi-1與核增殖抗原ki-67和凋亡抑制基因Bcl-2之間的關(guān)系以及Bcl-2+/ki-67-細(xì)胞的分布并探討其與胃癌臨床病理因素的關(guān)系及意義。 材料與方法： 臨床資料：收集中國醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院腫瘤外科2006年8月～2008年5月手術(shù)切除胃癌組織162例及其配對(duì)正常胃黏膜，腸上皮化生82例，不典型增生52例。標(biāo)本經(jīng)

4、10％福爾馬林固定，常規(guī)石蠟包埋，制成4μm厚的切片，構(gòu)建于4張組織芯片上。 免疫組化染色與結(jié)果判定：采用免疫組化PV-9000二步法檢測(cè)Bmi-1和ki-67的表達(dá)情況，兔抗人Bmi-1多克隆抗體(購自美國Abcam公司，工作濃度1:80)，鼠抗人Bcl-2單克隆抗體和鼠抗人ki-67單克隆抗體(購自福州邁新生物技術(shù)公司，工作液)，PV-9000免疫組化檢測(cè)試劑盒和DAB顯色試劑盒(購自北京中杉金橋生物技術(shù)公司)。采用免疫組化

5、雙染檢測(cè)Bcl-2+/ki-67-細(xì)胞的分布情況，免疫組化雙染試劑盒和內(nèi)源性生物素阻斷試劑盒(購自福州邁新生物技術(shù)公司)。全部組織芯片和普通石蠟切片均用檸檬酸修復(fù)液(pH6.0)高壓修復(fù)抗原，PBS代替一抗做陰性對(duì)照。結(jié)果判定：采用半定量計(jì)分方法，根據(jù)細(xì)胞染色強(qiáng)度(A)和染色細(xì)胞所占的比例(B)兩者乘積來判定。兩種評(píng)分相乘(A×B)，將結(jié)果分為：0分為陰性(-)；1～4分為弱陽性(+)；5～8分為中度陽性(++)；9～12分為強(qiáng)陽性(+

6、++)。免疫組化雙染采用BCIP/NBT和AEC雙顯色系統(tǒng)顯色，前者陽性反應(yīng)顆粒為紫黑色，后者陽性反應(yīng)顆粒為紅色，以胞漿出現(xiàn)特異性紅色顆粒，胞核未有明顯的紫黑色顆粒的細(xì)胞判定為Bcl-2+/ki-67-細(xì)胞。 結(jié)果： Bmi-1在正常胃黏膜、腸上皮化生、不典型增生和胃癌中的表達(dá)：胃癌組織中Bmi-1表達(dá)(52.5％)顯著高于正常胃黏膜(21.6％)，(X2=33.088，P<0.05)。在腸上皮化生黏膜和不典型增生中B

7、mi-1蛋白表達(dá)的陽性率分別為79.3％和80.8％，均顯著高于正常胃黏膜和胃癌，(X2=74.844，59.819，16.510，13.067，均P<0.05)。Bmi-1蛋白陽性顆粒主要表達(dá)在細(xì)胞漿。Bmi-1在胃癌中的表達(dá)與Lauren分型、Borrmann分型和胃癌臨床病理分期有關(guān)(P<0.05)，而與胃癌患者的性別、年齡、組織學(xué)分型和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移未見相關(guān)。 ki-67和Bcl-2在胃癌及其癌前病變中的表達(dá)和Bcl-2+

8、/ki-67-細(xì)胞的分布：Bcl-2陽性顆粒表達(dá)在細(xì)胞漿，ki-67陽性顆粒表達(dá)在細(xì)胞核。在腸化生黏膜，Bcl-2+/ki-67-細(xì)胞多分布在腺管隱窩部；在不典型增生中，偶見Bcl-2+/ki-67-細(xì)胞；在胃癌組織中，Bcl-2+/ki-67-細(xì)胞散在分布于癌細(xì)胞中。ki-67在胃癌中的表達(dá)與Borrmann分型有關(guān)(P<0.05)，而與胃癌患者的性別、年齡、組織學(xué)分型、Lauren分型和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移未見相關(guān)。Bcl-2在胃癌中的表達(dá)與

9、胃癌Lauren分型有關(guān)(P<0，05)，而與胃癌患者的性別、年齡、大體分型、組織學(xué)分型和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移未見相關(guān)。 胃癌和腸化生及不典型增生中Bmi-1與ki-67、Bcl-2表達(dá)的關(guān)系：Bmi-1在胃癌、腸化生和不典型增生中的表達(dá)均與Bcl-2呈正相關(guān)(rk=0.157，P=0.043；rk=0，270，P=0.038；rk=0.499，P=0.019)，Bcl-2在胃癌和腸化生中的表達(dá)與ki-67呈正相關(guān)(rk=0.225，P=