茶樹BAC文庫構建與相關基因克隆的篩選及測序.pdf

1、茶樹（Camellia sinensis）是一種重要的經濟作物，它的經濟價值不僅體現(xiàn)在茶葉上，茶樹花、果實也有很高的經濟價值。茶被譽為“世界三大無酒精飲料之一”，現(xiàn)已成為世界上流行的保健飲品。隨著生物技術的發(fā)展與應用，關于茶樹的科學研究已經逐漸深入至分子生物學水平，茶樹基因的分離與克隆已成為分子生物學研究的重要內容。
　　本課題是與安徽農業(yè)大學茶樹生物學與資源利用國家重點實驗室合作完成，以茶樹品種“舒茶早”植株為材料構建茶樹BAC

2、(bacterial artificial chromosome)文庫。該文庫含有161，280個克隆，保存在420塊384板中。隨機挑選450個BAC克隆檢測DNA插入片段，片段大小集中在100～130 kb之間，平均插入片段約為113kb，空載率小于2.5％，以茶樹基因組2.9 Gb計算，該文庫大約覆蓋整個茶樹基因組6.2倍。隨機挑選48個BAC克隆測BAC末端序列，參考NCBI數(shù)據(jù)庫中茶樹細胞器基因組序列信息，對BAC末端序列進行

3、比對。Blastn分析表明隨機挑選的48個克隆中沒有檢測到細胞器污染的克隆存在。
　　建立高效率的2步PCR篩選基因的方法對“舒茶早”茶樹BAC文庫進行篩選，獲得7個含有茶樹功能基因(Csi092H17、Csi020O15、Csi044B12、Csi274K14、Csi271P8、Csi106D7、Csi047O18)的BAC克隆。首先構建420個一級混合池用于第一輪PCR篩選，隨后對第一輪PCR篩選出的384板構建行池和列池，用