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文檔簡(jiǎn)介
1、本研究工作由兩部分組成，第一部分是關(guān)于油菜BAC文庫(kù)的構(gòu)建以及相關(guān)克隆的篩選;第二部分是水稻BAC克隆BIBAC亞克隆的構(gòu)建和相關(guān)克隆的篩選。
細(xì)菌人工染色體(bacterial artificial chromosome，BAC)文庫(kù)和人工雙元染色體(binary bacterial artificial chromosome，BIBAC)文庫(kù)在基因組的研究方面扮演了重要的角色。油菜是一種重要的農(nóng)作物，具有很好的經(jīng)濟(jì)效益。通
2、過油菜菜籽榨取的植物油不僅飽和脂肪酸的含量低而且還含有多種氨基酸、維生素，非常有益于人體的健康。
本研究中，利用中國(guó)農(nóng)科院油料作物研究所師家勤副研究員提供的油菜葉片，構(gòu)建了一個(gè)油菜的BAC文庫(kù)，用于相關(guān)基因的篩選和克隆。油菜BAC文庫(kù)總計(jì)103，680個(gè)克隆，存放在270個(gè)384孔板中，文庫(kù)平均插入片段大小為122.6kb，按油菜基因組1000M計(jì)算，覆蓋油菜基因組12.5倍，空載率低于2％，無(wú)細(xì)胞器污染;利用連鎖標(biāo)記，對(duì)整個(gè)
3、油菜BAC文庫(kù)進(jìn)行篩選，成功地篩選到4個(gè)陽(yáng)性克隆，這些克隆攜帶了與油菜性狀相關(guān)的基因。該部分工作對(duì)于通過遺傳改良提高油菜的產(chǎn)量和品質(zhì)具有特殊的意義。
BAC載體不能用來直接轉(zhuǎn)化植物，需借助BIBAC載體，通過BIBAC載體構(gòu)建的亞克隆文庫(kù)，能夠直接轉(zhuǎn)化植株。利用Sau3AI內(nèi)切酶對(duì)水稻BAC文庫(kù)中篩選出來的陽(yáng)性克隆進(jìn)行部分酶切，構(gòu)建了一個(gè)水稻BIBAC亞克隆文庫(kù)。該文庫(kù)共768個(gè)克隆，平均插入片段大小為18kb，覆蓋度為69倍
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