苧麻莖皮差減文庫的構(gòu)建及纖維發(fā)育相關(guān)基因的篩選.pdf

1、苧麻(Boehmeria nivea(L.) Gaud)，為蕁麻科苧麻屬多年生韌皮纖維作物。苧麻是最長的纖維作物之一，素有“天然纖維之王”的美譽(yù)。苧麻莖皮是由韌皮纖維細(xì)胞構(gòu)成的，是纖維的主要來源。本研究利用組織生長的階段性，利用苧麻莖皮地上莖的不同部位，以莖頂端為Tester，莖基部為Driver進(jìn)行差減雜交，構(gòu)建了兩個(gè)苧麻莖皮差減文庫P和U。得到以下結(jié)果：
　　 1.PCR產(chǎn)物進(jìn)行純化的差減文庫P挑取保存了1102個(gè)陽性克隆，

2、獲得了13個(gè)陽性克隆的測序結(jié)果，并進(jìn)行了BlastX和BlastN比對(duì)分析；PCR產(chǎn)物未經(jīng)過純化的差減文庫U挑取保存了1152個(gè)陽性克隆，獲得了185個(gè)陽性克隆的測序結(jié)果，并進(jìn)行了Blast分析和生物信息學(xué)分析。
　　 2.庫U中的EST序列除去小片段和載體序列后獲得171條有效序列，分為14類功能基因：能量相關(guān)的序列數(shù)量最多，有52條，占30％;未分類序列有39條，占23％;蛋白質(zhì)合成、細(xì)胞結(jié)構(gòu)相關(guān)序列各有14條，各占8％;未

3、明確分類序列有13條，約占8％;代謝相關(guān)序列10條，占6％;蛋白質(zhì)降解及貯藏相關(guān)序列有8條，占5％;轉(zhuǎn)錄、抗病及防御相關(guān)序列各有4條，各占2％;細(xì)胞生長及分化、胞內(nèi)運(yùn)輸、次生代謝相關(guān)序列各有3條，各占2％;轉(zhuǎn)運(yùn)、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)各有2條，各占1％。
　　 3.庫U中的EST序列除去低質(zhì)量序列和載體序列后獲得166條有效序列，拼接后得到37條unisecquences，包括19個(gè)contig和18個(gè)singlet。并從分子功能、細(xì)胞組成和

4、生物學(xué)過程三個(gè)方面對(duì)其分類和分析：
　　 在分子功能水平2上，與結(jié)合功能相關(guān)的序列有67％;與催化活性相關(guān)的序列有45％;與抗氧化活性相關(guān)的序列有18％;與分子結(jié)構(gòu)活性相關(guān)的序列有8％;與翻譯調(diào)節(jié)活性相關(guān)的序列有2％;與轉(zhuǎn)運(yùn)活性相關(guān)的序列有2％。
　　 在細(xì)胞組成水平2上，與組成細(xì)胞和部分細(xì)胞相關(guān)的序列有43％;與組成細(xì)胞器相關(guān)的序列有37％;與組成大分子復(fù)合體相關(guān)的序列有32％;與組成部分細(xì)胞器相關(guān)的序列有8％;與組成

5、胞外結(jié)構(gòu)相關(guān)的序列有2％。
　　 在生物學(xué)過程水平2上，與代謝過程相關(guān)的序列有62％;與細(xì)胞生理過程相關(guān)的序列有54％;與應(yīng)激反應(yīng)過程相關(guān)的序列有21％;與生物調(diào)控相關(guān)的序列有5％;與發(fā)育過程相關(guān)的序列有5％;與建立定位過程相關(guān)的序列有5％;與定位過程相關(guān)的序列有5％;與多細(xì)胞有機(jī)體過程相關(guān)的序列有2％;與生物過程的正調(diào)控與負(fù)調(diào)控相關(guān)序列分別有2％。
　　 4.Blast篩選出9條與纖維發(fā)育相關(guān)基因，它們分別是α-微管蛋