番茄抗黃化曲葉病毒基因Ty-2的精細(xì)定位及BAC文庫(kù)的構(gòu)建與篩選.pdf

1、番茄黃化曲葉病是番茄生產(chǎn)中的重要病害之一。目前該病已在我國(guó)主要的番茄栽培地區(qū)大范圍發(fā)生，對(duì)番茄生產(chǎn)帶來(lái)了嚴(yán)重甚至是毀滅性的危害，在保護(hù)地中利用60目以上的網(wǎng)紗進(jìn)行物理隔離，并從播種、定植至采收的全過(guò)程噴施殺蟲劑可防治煙粉虱對(duì)TYLCV的傳播，從而達(dá)到控制TYLCV的目的，但需要大量的投資和大量的農(nóng)藥，而露地番茄難以進(jìn)行物理隔離，僅采用農(nóng)藥防治難以對(duì)TYLCV進(jìn)行有效的控制。因此，抗病毒品種的選育已成為我國(guó)番茄育種最重要的育種目標(biāo)之一。目

2、前在野生資源中共發(fā)現(xiàn)5個(gè)抗性基因Ty-1、Ty-2、Ty-3、Ty-4和Ty-5，已通過(guò)分子標(biāo)記結(jié)合田間選擇培育出了一些抗病品種，主要含有Ty-1和Ty-3基因。Ty-2基因?qū)ξ覈?guó)的主要番茄黃化曲葉病毒小種具有抗性，因此，對(duì)Ty-2抗病基因進(jìn)行精細(xì)定位并克隆，對(duì)番茄抗病毒品種的選育及其功能研究均有極其重要的意義。本研究在已有的基礎(chǔ)上，以含有Ty-2基因材料12g-60、含有相同位置染色體片段感病的多毛番茄漸滲系LA4006及其雜交后的F

3、2群體為主要研究材料，對(duì)Ty-2基因進(jìn)行了精細(xì)定位、BAC文庫(kù)構(gòu)建、基因預(yù)測(cè)等研究，主要結(jié)果如下:
　　1.利用含有Ty-2基因材料12g-60與含有相同位置染色體片段感病的多毛番茄漸滲系LA4006雜交并獲得了相應(yīng)的F2代群體，利用帶毒的煙粉虱對(duì)該群體進(jìn)行自然接種鑒定，同時(shí)利用五個(gè)分子標(biāo)記對(duì)該群體的1320單株進(jìn)行遺傳分析，結(jié)果表明抗感比例為3∶1，符合單基因遺傳規(guī)律，抗病性鑒定結(jié)果與分子標(biāo)記的結(jié)果一致。
　　2.以含有T

4、y-2基因材料12g-60為模板構(gòu)建細(xì)菌人工染色體(BAC)文庫(kù)，從BAC中共篩選到4個(gè)陽(yáng)性單克隆，分別為F17F24，F(xiàn)18E2，F(xiàn)118A13，F(xiàn)187N19。對(duì)這4個(gè)單克隆進(jìn)行全長(zhǎng)測(cè)序表明，Ty-2基因所在的多毛番茄片段與相同位置的普通番茄染色體片段存在一個(gè)倒位，因而解釋了在Ty-2基因精細(xì)定位研究中出現(xiàn)的嚴(yán)重重組抑制現(xiàn)象。
　　3.利用生物信息學(xué)手段對(duì)4個(gè)陽(yáng)性克隆序列進(jìn)行候選基因的預(yù)測(cè)，結(jié)果在目的染色體片段上存在21個(gè)的基