氯苯甲烷銨和噻嗎心胺對人晶狀體上皮細胞損傷作用的比較研究.pdf

1、通過體外培養(yǎng)人晶狀體上皮細胞株(SRA01/04)，加入不同濃度的氯苯甲烷銨和噻嗎心胺，探討它們對人晶狀體上皮細胞的損傷及刺激細胞分泌炎性介質(zhì)的作用。 材料和方法 體外培養(yǎng)人晶狀體上皮細胞株(SRA01/04)于含10％小牛血清的DMEM培養(yǎng)基中至細胞長滿融合，胰酶消化后均勻種在六孔板中。將噻嗎心胺和氯苯甲烷銨分別配制為0.5％和0.01％(均為噻嗎心胺眼液中所使用濃度)，然后將其稀釋為不同濃度：噻嗎心胺稀釋10倍、20

2、倍、30倍、60倍和100倍；氯苯甲烷銨稀釋100倍、200倍、300倍、600倍和1000倍。將上述不同稀釋倍數(shù)的噻嗎心胺和氯苯甲烷銨逐一加入六孔板中作用于人晶狀體上皮細胞，每種濃度作用3孔細胞，余3孔細胞不加任何藥物設(shè)為正常對照組。孵育48小時后顯微鏡下觀察細胞形態(tài)的改變并離心提取細胞上清液，濃縮凍成干粉狀，加少量DMEM培養(yǎng)基將其溶解，再做酶聯(lián)免疫吸附實驗(enzyme-linked immunosorbentassay，ELJS

3、A)檢測上清液中所含白介素-1α(interleukin 1 α，IL-lα)和前列腺素E<,2>(prostaglandin E2，PGE<,2>)的濃度并與正常對照組比較，以了解藥物對細胞毒性作用的差異；同樣，將SRAOl/04均勻種在96孔板中，滴加不同稀釋倍數(shù)的噻嗎心胺和氯苯甲烷銨，孵育48小時后用MTT還原測定法(Mono-nuclear cell direc cytotoxicity assay，MTT)檢測細胞活性。

4、 結(jié)果 實驗發(fā)現(xiàn)，0.01％的氯苯甲烷銨和0.5％的噻嗎心胺作用人晶狀體上皮細胞24小時后，前者導(dǎo)致細胞全部死亡，后者尚有部分細胞存活；48小時后兩者作用的細胞大部分脫壁；在同樣稀釋100倍的情況下，氯苯甲烷銨作用的細胞72小時后部分脫壁死亡，而噻嗎心胺作用的細胞形態(tài)大小正常，且可見細胞分裂增殖。藥物作用細胞48小時后提取上清液行ELISA檢測發(fā)現(xiàn)，與正常對照組相比，細胞分泌PGE<,2>和IL-1α的量取決于藥物作用的濃度

5、：噻嗎心胺在高濃度時對細胞有直接殺傷作用，稀釋20倍時對細胞的炎性刺激作用最強(P<0.05)，當(dāng)濃度逐漸降低時，對細胞的毒性作用隨之減弱；而氯苯甲烷銨在高濃度時直接導(dǎo)致細胞死亡，隨著稀釋倍數(shù)增加，細胞存活率升高，但對細胞的作用轉(zhuǎn)變?yōu)槁匝仔源碳?，即使在稀?000倍的情況下刺激細胞分泌炎性介質(zhì)的量也明顯高于正常對照組(P<0.05)。 結(jié)論 氯苯甲烷銨作為噻嗎心胺眼液的防腐劑，是對人晶狀體上皮細胞造成損傷并刺激其強烈分