β2受體激動(dòng)劑對支氣管哮喘樹突狀細(xì)胞功能的影響.pdf

1、支氣管哮喘是常見的呼吸系統(tǒng)疾病,隨著社會工業(yè)化程度的提高,大氣污染的加重,全球發(fā)病率成上升趨勢。β2受體激動(dòng)劑作為傳統(tǒng)的治療哮喘的藥物,其機(jī)制主要是作用于呼吸道的β2受體,激活腺苷酸環(huán)化酶,使細(xì)胞內(nèi)的環(huán)磷腺苷(cAMP)含量增加,游離Ca2+減少,從而松弛支氣管平滑肌。并可通過抑制肥大細(xì)胞等致敏細(xì)胞釋放過敏反應(yīng)介質(zhì),解除支氣管痙攣。我們設(shè)想β2受體激動(dòng)劑是否會是通過肺部樹突狀細(xì)胞來起作用的?故本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用β2受體激動(dòng)治療哮喘小鼠模型來觀察

2、樹突狀細(xì)胞(DC)功能的變化。 研究目的：通過研究β2受體激動(dòng)劑(沙丁胺醇)對哮喘小鼠肺臟DC表面分子表達(dá)的變化及其對T淋巴細(xì)胞增殖、分化能力誘導(dǎo)的影響來驗(yàn)證沙丁胺醇治療哮喘的作用,并分析此作用可能是通過肺部DC來實(shí)現(xiàn)的。 研究方法：將80只4-6周齡雌性健康BALB/C小鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為5組,分別稱為沙丁胺醇組,地塞米松組,沙丁胺醇+地塞米松組,生理鹽水組和正常對照組,每組16只。正常對照組不做任何處理,僅正常飼養(yǎng)

3、。按照我們以往方法成功建立哮喘模型后,對前四組小鼠分別以不同的藥物(硫酸沙丁胺醇,地塞米松,硫酸沙丁胺醇+地塞米松,生理鹽水)霧化吸入進(jìn)行治療。于末次霧化治療24 h后各組小鼠取4只麻醉后結(jié)扎右下肺葉,然后行余肺支氣管肺泡灌洗(BAL),回收得支氣管肺泡灌洗液(BALF)離心、留上清作IL-4、IL-5測定。后剪下已結(jié)扎的右下肺葉浸入4％多聚甲醛中固定24小時(shí),以備病理切片用。余下每組12只小鼠摘除眼球取血并離心分離血清,用ELISA法

4、進(jìn)行檢測血清中HRP-IgEmAb水平。用膠原酶II消化肺組織,運(yùn)用免疫磁珠法分離肺臟DC,采用流式細(xì)胞儀檢測DC表面分子CD80、CD86、MHCII類分子表達(dá),最后以各組小鼠肺臟DC和DO11.10(OVA特異性轉(zhuǎn)基因小鼠)脾臟T淋巴細(xì)胞共培養(yǎng)3天后用ELISA法測量上清中細(xì)胞因子IL-4、IL-5的水平以及用3H-TdR摻入法檢測T淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)。 結(jié)果： 1、生理鹽水組小鼠肺臟H-E染色可見大量炎細(xì)胞浸潤、杯狀

5、細(xì)胞增生及支氣管平滑肌增厚,其它四組不明顯。 2、四組哮喘小鼠血清IgE水平均增高,且生理鹽水組增高更明顯,正常對照組小鼠IgE很低。 3、生理鹽水組小鼠肺泡灌洗液IL-4、IL-5水平測定較其它四組增高明顯。 4、生理鹽水組小鼠肺臟DC表面分子CD80、CD86、MHC II表達(dá)較其它組上調(diào)。 5、四組哮喘小鼠肺臟DC和T淋巴細(xì)胞共培養(yǎng)后T淋巴細(xì)胞均有增殖,生理鹽水組較其它三組增高明顯,正常對照組無增殖

6、反應(yīng)。 6、生理鹽水組小鼠肺臟DC和T淋巴細(xì)胞共培養(yǎng)后上清IL-4、IL-5水平較其它四組增高明顯。 結(jié)論： 1、沙丁胺醇可以改善支氣管哮喘的病理改變。 2、沙丁胺醇可以下調(diào)支氣管哮喘小鼠肺臟DC的CD80、CD86和MHC II表面分子的表達(dá)。 3、沙丁胺醇可以抑制支氣管哮喘小鼠肺臟DC刺激T淋巴細(xì)胞的增殖能力。 4、沙丁胺醇可以抑制Th2細(xì)胞因子(IL-4、IL-5)的產(chǎn)生,其抑制免疫