磁場(chǎng)結(jié)合順鉑對(duì)腫瘤細(xì)胞K562殺傷效應(yīng)機(jī)制的初步研究.pdf

1、目的：研究穩(wěn)恒磁場(chǎng)聯(lián)合順鉑對(duì)K562細(xì)胞殺傷作用的機(jī)制；用免疫印跡(western blotting)檢測(cè)磁場(chǎng)處理前后K562細(xì)胞Cyclin B1表達(dá)量的變化。 方法： 1．MTT 法檢測(cè)順鉑聯(lián)合磁場(chǎng)對(duì)K562細(xì)胞(人紅白血病細(xì)胞)活性的改變。 2．磁場(chǎng)聯(lián)合順鉑作用于K562細(xì)胞后，通過(guò)光學(xué)顯微鏡、原子力顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)的變化；流式細(xì)胞儀分析檢測(cè)細(xì)胞周期分布的變化；單細(xì)胞凝膠電泳(SCGE)檢測(cè)細(xì)胞 DNA的

2、損傷。 3．用western blotting檢測(cè)同步化K562細(xì)胞各周期時(shí)相中Cyclin B1的變化趨勢(shì)； 4．磁場(chǎng)處理K562細(xì)胞后，用western blotting檢測(cè)CyclinB1蛋白含量的變化。 結(jié)果： 1．K562細(xì)胞以1×10<'5>cells/mL 的細(xì)胞密度接種，MTT 檢測(cè)結(jié)果表明，磁場(chǎng)聯(lián)合10μg/mL順鉑處理K562細(xì)胞12h后，細(xì)胞活性受到顯著抑制。 2．磁場(chǎng)聯(lián)合1

3、0μg/mL順鉑處理K562細(xì)胞12h后，光學(xué)顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)發(fā)現(xiàn)，磁場(chǎng)聯(lián)合順鉑組細(xì)胞碎片較多。原子力顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)，磁場(chǎng)聯(lián)合順鉑組細(xì)胞表面出現(xiàn)較大的孔洞。流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期分布發(fā)現(xiàn)，磁場(chǎng)可將細(xì)胞阻滯于G2／qVl期；順鉑可將細(xì)胞阻滯于S期；順鉑聯(lián)合磁場(chǎng)處理細(xì)胞12h后，大部分細(xì)胞被阻滯于S期。SCGE檢測(cè)的結(jié)果表明，磁場(chǎng)協(xié)同順鉑作用于K562細(xì)胞可以增加細(xì)胞DNA的損傷。原子力顯微鏡觀察磁場(chǎng)與順鉑共同作用于K562細(xì)胞后，其DN

4、A的結(jié)構(gòu)變化，發(fā)現(xiàn)聯(lián)合處理組DNA交聯(lián)及斷裂均增加。 3．用western blotting檢測(cè)Cyclin B1蛋白的周期變化，結(jié)果表明，K562細(xì)胞Cyclin B1從S期初期開(kāi)始表達(dá)，隨后逐步升高，在G2/M期達(dá)到最高點(diǎn)，進(jìn)入M期后迅速降低。 4．磁場(chǎng)分別處理K562細(xì)胞12h、24h、36h后，用western blotting檢測(cè)CyclinB1含量變化，發(fā)現(xiàn)磁場(chǎng)處理組與對(duì)照組相比，Cyclin B1蛋白表達(dá)量