IL-23單獨(dú)或聯(lián)合IL-2誘導(dǎo)人外周血單個(gè)核細(xì)對(duì)K562細(xì)胞殺傷效應(yīng)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：白血病是血液系統(tǒng)常見的惡性腫瘤，目前臨床上主要通過化療、骨髓移植等手段使部分患者達(dá)到完全緩解，但多數(shù)患者終因耐藥、復(fù)發(fā)等情況導(dǎo)致治療失敗。因此，要進(jìn)一步延長白血病治療后緩解期和消滅微量殘存的白血病細(xì)胞，免疫治療是重要的可選方法之一。
　　 IL-23(interleukin-23)是Oppmann等在2000年報(bào)告的一個(gè)新的異二聚體細(xì)胞因子，由p19和IL-12p40兩個(gè)亞基組成。IL-23可促進(jìn)記憶性T細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)活化

2、的T細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞(DC)產(chǎn)生干擾素-γ(IFN-γ)和白細(xì)胞介素12(IL-12)等細(xì)胞因子，與自身免疫及炎癥反應(yīng)性疾病密切相關(guān)，且具有抗腫瘤和抑制腫瘤轉(zhuǎn)移的作用，有望成為新的免疫治療因子。IL-23誘導(dǎo)T細(xì)胞產(chǎn)生IFN-γ較少，而不會(huì)在臨床應(yīng)用時(shí)產(chǎn)生嚴(yán)重的毒副反應(yīng)。因此，IL-23有可能成為腫瘤治療中更為安全的選擇。IL-2是白細(xì)胞介素家族中的重要成員之一，它能促進(jìn)T細(xì)胞增殖，刺激細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(CTL)的增殖與分化，增強(qiáng)自然

3、殺傷(NK)細(xì)胞的細(xì)胞毒活性。研究證實(shí)，IL-2在體內(nèi)具有顯著的抗腫瘤作用，但需依賴于外源性大劑量IL-2的持續(xù)輸注并伴有嚴(yán)重的毒副作用。為減輕其毒副作用，近年來有不少關(guān)于小劑量IL-2與其他細(xì)胞因子聯(lián)合誘導(dǎo)外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)對(duì)腫瘤細(xì)胞殺傷效應(yīng)的報(bào)道，且多呈協(xié)同增強(qiáng)效應(yīng)。本研究主要目的是探討IL-23單獨(dú)或聯(lián)合應(yīng)用IL-2誘導(dǎo)人PBMC對(duì)白血病細(xì)胞的殺傷效應(yīng)及作用機(jī)制，希望為白血病的免疫治療提供新的線索，以進(jìn)一步提高臨床惡性血

4、液病的治療效果。
　　 方法：Ficoll密度梯度離心法分離正常人PBMC。IL-23(50ng/mL)，IL-2(100IU/mL)單獨(dú)或聯(lián)合體外誘導(dǎo)PBMC72h，與白血病細(xì)胞株K562共同培養(yǎng)，采用CCK-8法測(cè)定不同時(shí)間誘導(dǎo)后的PBMC對(duì)K562細(xì)胞的殺傷效應(yīng)；采用ELISA方法檢測(cè)殺傷活性最大時(shí)細(xì)胞培養(yǎng)液中IFN-γ的水平；應(yīng)用RQ-PCR法檢測(cè)誘導(dǎo)后PBMC的穿孔素、顆粒酶B的表達(dá)水平變化。所得結(jié)果運(yùn)用SPSS13.

5、0統(tǒng)計(jì)軟件包處理，以α=0.05為顯著性檢驗(yàn)水準(zhǔn)。
　　 結(jié)果：
　　 1．IL-23單獨(dú)或聯(lián)合IL-2體外誘導(dǎo)正常人PBMC后對(duì)白血病K562細(xì)胞株殺傷活性的影響：IL-23(50ng/mL)處理后的PBMC，作用于K562細(xì)胞24h、48h、72h后殺傷率分別為：(15.12±0.58)％、(18.71±1.07)％、(24.36±1.59)％;IL-2(100IU/mL)作用于K562細(xì)胞24h、48h、72h后殺

6、傷率分別為：(15.64±0.60)％、(19.75±0.96)％、(25.34±1.71)％;IL-23(50ng/mL)+IL-2(100IU/mL)作用于K562細(xì)胞24h、48h、72h后殺傷率分別為：(22.58±0.67)％、(27.84±1.31)％、(34.4±1.24)％。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示，IL-23(50ng/mL)、IL-2(100IU/mL)及兩者聯(lián)合作用后的PBMC均對(duì)K562細(xì)胞有殺傷活性，隨著時(shí)間延長，殺傷率

7、明顯增加，各個(gè)時(shí)間點(diǎn)比較，有顯著性差異。IL-23能促進(jìn)PBMC對(duì)K562細(xì)胞的殺傷活性，IL-23與IL-2聯(lián)合具有協(xié)同作用，可進(jìn)一步增強(qiáng)殺傷活性，而且在作用于PBMC72h時(shí)殺傷活性最高。
　　 2．IL-23單獨(dú)或聯(lián)合IL-2作用于正常人PBMC后對(duì)培養(yǎng)液中IFN-γ表達(dá)的影響：IL-23(50ng/mL)、IL-2(1001U/mL)及IL-23(50ng/mL)+IL-2(100IU/mL)分別作用于PBMC72h后，

8、檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)液上清中IFN-γ的含量水平為：156.08±12.40、191.68±16.92、615.83±21.39，對(duì)照組為44.39±5.90。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示，各細(xì)胞因子組培養(yǎng)液中分泌IFN-γ水平均顯著高于未加細(xì)胞因子的空白對(duì)照組，其中以IL-23（50ng/mL）+IL-2(100IU/mL)組誘導(dǎo)PBMC表達(dá)IFN-γ的水平最高，與其它兩組比較，有顯著性差異。IL-23(50ng/mL)組誘導(dǎo)PBMC表達(dá)IFN-γ的水平與

9、IL-2(100IU/mL)組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　 3．IL-23單獨(dú)或聯(lián)合IL-2作用于正常人PBMC后對(duì)穿孔素mRNA表達(dá)水平的影響：RQ-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示，IL-23(50ng/mL)、IL-2(100IU/mL)及IL-23(50ng/mL)+IL-2(100IU/mL)分別作用于PBMC72h后，穿孔素的RQ值為：1.39±0.23、1.54±0.16、2.32±0.22，空白對(duì)照組為0.51±0.12。統(tǒng)計(jì)學(xué)顯

10、示，各細(xì)胞因子組PBMC的穿孔素mRNA的表達(dá)量均較對(duì)照組明顯增加，且IL-23(50ng/mL)+IL-2(100IU/mL)組的穿孔素mRNA表達(dá)量顯著高于其他組，IL-2(100IU/mL)組與IL-23(50ng/mL)組穿孔素mRNA的表達(dá)量比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　 4．IL-23單獨(dú)或聯(lián)合IL-2作用于正常人PBMC后對(duì)顆粒酶BmRNA表達(dá)水平的影響：RQ-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示，IL-23(50ng/mL)、IL-2(

11、100IU/mL)及IL-23(50ng/mL)+IL-2(100IU/mL)分別作用于PBMC72h后，顆粒酶B的RQ值為：1.57±0.33、1.74±0.11、2.298±0.21，空白對(duì)照組為0.38±0.12。統(tǒng)計(jì)學(xué)顯示，各細(xì)胞因子組PBMC的顆粒酶BmRNA的表達(dá)量均較對(duì)照組明顯增加，且IL-23(50ng/mL)+IL-2(100IU/mL)組的顆粒酶BmRNA表達(dá)量顯著高于其他組，IL-2(100IU/mL)組與IL-2