miR-328對K562細胞增殖的影響及作用機制.pdf

1、目的:
　　構(gòu)建miR-328過表達及下調(diào)表達的真核表達載體，探討miR-328對慢性粒細胞白血病(CML)急變期細胞株K562細胞增殖的影響及作用機制。
　　方法:
　　構(gòu)建miR-328過表達及下調(diào)表達的真核表達載體hsa-miR-328及hsa-miR-328-inhibition，核苷酸測序鑒定重組質(zhì)粒，利用脂質(zhì)體lipofectamineTM2000介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移技術(shù)將質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染至K562細胞；通過熒光顯微

2、鏡觀察各組K562細胞的轉(zhuǎn)染情況；通過實時熒光定量PCR檢測各組K562細胞中miR-328、C/EBP mRNA的表達水平；CCK-8檢測各組K562細胞增殖的情況；Western-Blot方法檢測各組K562細胞中C/EBPα蛋白表達的情況。
　　結(jié)果:
　　1.成功構(gòu)建重組真核表達載體：hsa-miR-328、hsa-miR-328-inhibition；
　　2.將載體轉(zhuǎn)染K562細胞，24h后在熒光顯微鏡下可

3、見熒光細胞，表明重組質(zhì)粒成功轉(zhuǎn)入K562細胞，48h、72h后可見熒光細胞數(shù)逐漸增多；
　　3.實時熒光定量PCR結(jié)果顯示與空白對照組、Lip2000組、空載體組，hsa-miR-328-inhibition組相比，hsa-miR-328組的miR-328呈現(xiàn)明顯表達，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（p＜0.001）；
　　4. CCK-8方法檢測結(jié)果顯示與空白對照組、Lip2000組、空載體組，hsa-miR-328-inhibitio

4、n組相比，has-miR-328組的K562細胞的增殖明顯受抑制，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（p＜0.001）；
　　5.實時熒光定量PCR結(jié)果顯示與空白對照組、Lip2000組、空載體組，hsa-miR-328-inhibition組相比，has-miR-328組的K562細胞中C/EBPαmRNA表達無明顯變化，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（p＞0.05）；
　　6.Western-Blot檢測發(fā)現(xiàn)has-miR-328組的K562細胞中C/