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文檔簡介
1、目的:尋找肝臟F蛋白誘導免疫耐受的新靶標,探討肝移植免疫耐受的可能機制,為人類肝移植特異性免疫耐受的成功誘導提供實驗依據(jù)和理論支持。
方法:留取空白對照組(未經(jīng)原位肝移植的Wistar大鼠,立即處死,n=6)、免疫排斥組(移植術后7d,Wistar→SD,n=6)和免疫耐受組(術前1周胸腺內(nèi)注射供體源性F蛋白0.4mg,移植后100d,Wistar→SD,n=6)受體大鼠的肝臟組織,Trizol法提取肝組織總RNA,逆轉(zhuǎn)錄PC
2、R合成cDNA,采用熒光定量PCR技術檢測移植肝臟內(nèi)FLJ11565、MGC45806、DKFZp434K1210、F蛋白基因等免疫耐受相關基因的表達水平;采用脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶介導的缺口末端標記法檢測移植大鼠肝組織浸潤淋巴細胞的凋亡情況;利用氨基酸分析技術和液質(zhì)聯(lián)用技術分析肝臟勻漿液的氨基酸、中小分子代謝物等代謝組學的變化。
結果:1、排斥組的免疫耐受相關基因表達水平較空白組低,耐受組的目的基因表達水平遠高于排斥組,且
3、較空白組有所升高(P<0.05)。2、空白組、排斥組和耐受組浸潤淋巴細胞凋亡指數(shù)分別為(8.83±0.43)%、(11.32±1.29)%和(19.00±1.96)%,任意兩組的凋亡指數(shù)均有統(tǒng)計學差異(P<0.05)。3、與排斥組相比,耐受組的?;撬?、谷氨酸、纈氨酸、甲硫氨酸、賴氨酸和色氨酸含量明顯降低(P<0.05),甘氨酸含量明顯升高(P<0.05);移植肝臟代謝輪廓分析篩選出有意義的特征離子47個,其中排斥組和耐受組均升高的離子5
4、個,耐受組較正常組和排斥組升高的離子2個,降低的離子2個。經(jīng)HMDB數(shù)據(jù)庫搜索和結構推導初步鑒定出不同代謝物18種,包括D-塔格糖、尿刊酸、本膽烷醇酮等。
結論:FLJ11565、MGC45806、DKFZp434K1210和F蛋白基因在調(diào)節(jié)特異性免疫耐受的過程中可能起著重要作用;移植物中浸潤淋巴細胞的細胞凋亡分析有助于直觀判斷移植物處于排斥或耐受狀態(tài),移植物中浸潤淋巴細胞的凋亡有助于誘導移植物免疫耐受;谷氨酰胺、甘氨酸和甲硫
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