F蛋白的表達及其誘導免疫耐受的初步研究.pdf

1、肝臟疾病嚴重影響人類健康，而肝癌是世界范圍內(nèi)最常見的惡性腫瘤之一，其致死率僅次于肺癌、胃癌、結(jié)腸癌而居第四位，病毒性肝炎、肝纖維化、肝硬化等都是肝癌主要的致病原因。目前肝移植是舉世公認的治療一些終末期肝病最為有效的手段。但肝移植后由于免疫抑制劑的大量使用，可造成慢性腎衰、心血管病、突發(fā)性高血壓及惡性腫瘤等嚴重并發(fā)癥，極大地影響了病人的生存質(zhì)量。因此肝移植后的主要目標就是在最佳化和最小化使用免疫抑制劑的基礎(chǔ)上獲得免疫耐受，提高病人生存質(zhì)量

2、。肝移植免疫耐受的機制有多種假說，F(xiàn)蛋白能夠誘導免疫耐受是近年新提出的一種理論。F蛋白是肝細胞膜上和胞漿內(nèi)特有表達蛋白，由非MHC基因編碼，據(jù)報道同種肝移植模型受者血清中均可檢測到這種抗原，但其作用還不清楚。 本文采用原核系統(tǒng)表達F蛋白。我們對本實驗室預先保存的菌種E.coliBL21(DE3)pLysS表達和純化，并進行SDS-PAGE和Westernblot，證實該菌種含有目的蛋白——F蛋白。我們利用該菌種進行表達并改善純化

3、條件，低溫誘導可得到大量可溶性的目的蛋白，用1/2×Washbuffer可得到較高濃度的目的蛋白，用于后續(xù)的動物實驗。我們將20只SD大鼠隨機分為4組，接受不同的處理，I組一次性胸腺注射0.2mlPBS做為陰性對照；II組足墊注射含1mg用相同體積弗氏完全佐劑乳化的F蛋白，一周后足墊注射含1mg用相同體積弗氏不完全佐劑乳化的F蛋白，每周1次，連續(xù)3次；III組一次胸腺內(nèi)注射4mgF蛋白，每葉2mg；IV組一次腹腔注射環(huán)磷酰胺100mg/

4、kg做為陽性對照。7天后處死動物，留取外周血及胸腺標本，用TUNEL試劑盒對胸腺標本進行檢測，判斷細胞凋亡情況。用IL-10試劑盒檢測外周血清IL-10水平。結(jié)果顯示F蛋白能誘導胸腺淋巴細胞的凋亡，并促進IL-10的分泌。其機制可能是當胸腺接種F蛋白后，胸腺作為一種特殊器官，在被異基因抗原修飾后能產(chǎn)生克隆清除，進而通過對T細胞發(fā)育和成熟的影響，誘導低免疫應答狀態(tài)的發(fā)生。F蛋白在肝病早期診斷與治療、肝損傷程度的判斷以及肝移植免疫耐受方面的