甲狀腺功能減低對仔鼠大腦膠質(zhì)細(xì)胞及相關(guān)行為發(fā)育的影響.pdf

1、目的：
　　 先天性甲狀腺功能減低癥是兒童最常見的內(nèi)分泌疾病之一，如不及時(shí)治療，可導(dǎo)致體格發(fā)育及認(rèn)知、行為發(fā)育的異常。本實(shí)驗(yàn)的目的是研究甲狀腺功能減低對仔鼠大腦少突膠質(zhì)細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞發(fā)育的影響、作用可逆性，及相關(guān)調(diào)控機(jī)制，同時(shí)，探討甲減對膠質(zhì)細(xì)胞相關(guān)行為發(fā)育的影響。
　　 方法：
　　 將交配后的孕C57BL/6J小鼠，按處理?xiàng)l件不同分為：①持續(xù)甲減組：合籠第10天開始給予母鼠含0.03％甲巰咪唑(MMI)的

2、飲用水，一直到所有仔鼠處死為止。②早期甲減組：合籠第10天開始給予母鼠含0.03％甲巰咪唑(MMI)的飲用水，在仔鼠出生后第7天(P7)時(shí)，改為不含MMI的正常飲用水。③對照組：一直喂清潔飲用水，其它實(shí)驗(yàn)控制因素同其余兩組。
　　 在母鼠產(chǎn)后21天（仔鼠斷奶）時(shí)，測定母鼠血清甲狀腺激素TT3、TT4、FT3、FT4水平。
　　 在仔鼠發(fā)育過程中進(jìn)行以下實(shí)驗(yàn)：①稱量仔鼠體重，并測定仔鼠血清甲狀腺激素TT3、TT4、FT3、

3、FT4水平；②分別采用Real-time PCR及Western blotting的方法測定仔鼠腦內(nèi)2'-3'環(huán)核苷酸-3'-磷酸二酯酶（CNPase，標(biāo)記少突膠質(zhì)細(xì)胞）的mRNA和蛋白表達(dá)水平；③分別采用Real-time PCR及Western blotting的方法測定仔鼠腦內(nèi)膠質(zhì)纖維酸性蛋白（GFAP，標(biāo)記星形膠質(zhì)細(xì)胞）的mRNA及蛋白表達(dá)水平；④采用Real-time PCR法測定腦內(nèi)血管緊張1型及2型受體的mRNA水平；⑤利

4、用新事物識別實(shí)驗(yàn)測試仔鼠的視覺認(rèn)知行為。
　　 結(jié)果：
　　 1、母鼠體內(nèi)甲狀腺激素水平改變：在產(chǎn)后21天時(shí)，持續(xù)甲減組母鼠血甲狀腺激素TT3、FT3、TT4及FT4水平比對照組母鼠均顯著下降（P<0.05），而早期甲減組母鼠與對照組之間無顯著性差異。
　　 2、仔鼠出生后P7、P14及P21天甲狀腺激素改變：①持續(xù)甲減組仔鼠血TT3水平在各時(shí)間點(diǎn)均明顯低于對照組（P<0.05），早期甲減組血TT3水平在P21天

5、恢復(fù)正常。②持續(xù)甲減組仔鼠血FT3水平比對照組下降，且在P14及P21天時(shí)，具有顯著性差異（P<0.05）；早期甲減組仔鼠與對照組相比無顯著性差異。③持續(xù)甲減組仔鼠血TT4水平在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)均明顯低于對照組（P<0.01）；早期甲減組在P21天恢復(fù)正常。④持續(xù)甲減組仔鼠血FT4水平在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)均明顯低于對照組仔鼠（P<0.01)；早期甲減組在P60天時(shí)才恢復(fù)正常。
　　 3、仔鼠體重的改變：在仔鼠出生后P7、P14及P21天時(shí)，持

6、續(xù)甲減組及早期甲減組仔鼠的體重均明顯低于對照組仔鼠，提示了在甲狀腺功能恢復(fù)后，體格發(fā)育的落后仍不能被糾正。
　　 4、甲狀腺功能減低對仔鼠大腦少突膠質(zhì)細(xì)胞CNPase的作用：
　　 CNPase-mRNA水平變化：持續(xù)甲減組仔鼠腦內(nèi)CNPase的mRNA水平在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)均明顯低于正常對照組仔鼠(P<0.05)；而P14天時(shí)，早期甲減組仔鼠腦內(nèi)CNPase-mRNA水平仍明顯低于正常對照組仔鼠(P<0.01)，之后開始恢復(fù)

7、。
　　 CNPase蛋白水平變化：在發(fā)育的各個(gè)時(shí)點(diǎn)，持續(xù)甲減組仔鼠腦內(nèi)CNPase的蛋白水平均低于對照組，且在P7及P14天時(shí)具有顯著性差異(P<0.05)；早期甲減組仔鼠的腦CNPase蛋白量在P14天時(shí)，仍顯著低于對照組仔鼠(P<0.05)，之后無顯著性差異。
　　 5、甲狀腺功能減低對仔鼠大腦星形膠質(zhì)細(xì)胞GFAP的作用：
　　 GFAP-mRNA水平變化：持續(xù)甲減組仔鼠大腦GFAP-mRNA水平與對照組仔

8、鼠相比，表現(xiàn)為先上升，后下降，至P60天時(shí)，明顯低于對照組(P<0.01)；早期甲減組仔鼠腦內(nèi)GFAP-mRNA水平在P21天時(shí)明顯高于對照組，P60天時(shí)又明顯低于正常對照組水平。
　　 GFAP蛋白水平變化：持續(xù)甲減組仔鼠腦內(nèi)GFAP的蛋白表達(dá)量在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)均低于對照組；早期甲減組與對照組之間無顯著性差異。
　　 6、甲狀腺功能減低對仔鼠大腦血管緊張素受體AT1、AT2的作用
　　 AT1受體mRNA水平變化：

9、持續(xù)甲減組仔鼠腦內(nèi)AT1受體mRNA水平在P1天時(shí)一過性高于對照組仔鼠，之后各發(fā)育時(shí)點(diǎn)均明顯低于正常對照組。早期甲減組AT1受體mRNA在P14天時(shí)仍低于正常水平，之后開始恢復(fù)。
　　 AT2受體mRNA水平變化：持續(xù)甲減組仔鼠腦內(nèi)AT2受體基因表達(dá)量在P1至P60天時(shí)均高于對照組，且在P1、P14及P21天時(shí)具有顯著性差異(P<0.05)。早期甲減組仔鼠與正常對照組仔鼠比較，無顯著性差異。
　　 7、仔鼠視覺認(rèn)知行為改

10、變：在P50天進(jìn)行的新事物識別任務(wù)中，對照組仔鼠對新事物的探索時(shí)間百分比明顯高于機(jī)會水平(50％)，而兩組甲減仔鼠與機(jī)會水平相比無顯著性差異。
　　 結(jié)論：
　　 1、發(fā)育期甲狀腺功能減低可引起仔鼠生長發(fā)育的落后及血清甲狀腺激素水平的下降，在甲狀腺功能恢復(fù)后，體重改變?nèi)猿掷m(xù)存在。
　　 2、甲狀腺功能減低造成大腦少突膠質(zhì)細(xì)胞CNPase的基因表達(dá)下降、高峰延遲，同時(shí)蛋白表達(dá)水平也下降，這種改變可隨著甲狀腺功能的恢

11、復(fù)而得到糾正。
　　 3、甲狀腺功能減低可擾亂大腦星形膠質(zhì)細(xì)胞GFAP的基因表達(dá)，導(dǎo)致甲減仔鼠腦GFAP蛋白表達(dá)量的下降，甲狀腺功能恢復(fù)后GFAP蛋白表達(dá)正常。
　　 4、甲狀腺功能減低擾亂大腦AT1及AT2受體的基因表達(dá)，甲狀腺功能恢復(fù)后可糾正。腦AT1、AT2受體基因表達(dá)紊亂可能是大腦膠質(zhì)細(xì)胞發(fā)育異常的機(jī)制之一。
　　 5、發(fā)育期甲狀腺功能減低可造成仔鼠成年期視覺認(rèn)知行為異常，且甲狀腺功能恢復(fù)后仍持續(xù)存在。甲