新型納米材料HPD作為基因載體的研究.pdf

1、目的：研究新型納米載體HPC-g-PDMAEMA（HPD）對于不同腫瘤細胞系的轉染能力，初步探索HPD對于siRNA的運載能力以及HPD運載wt-p53對腫瘤生長的抑制效果，評價其在基因治療及研究中的作用。
　　 方法：凝膠電泳分析HPD與pDNA的結合能力；HPD和Lipo2K運載綠色熒光蛋白（GFP）質粒，分別轉染MCF7、973、JF305三種腫瘤細胞系，采用流式細胞儀檢測其轉染效率；MTS檢測HPD載體的細胞毒性；HPD

2、和Lipo2K運載針對GADPH的siRNA，轉染MCF7，利用RT-PCR檢測其RNA轉染效率；構建pEGFP-C1-p53重組質粒，HPD和Lipo2K分別攜帶該質粒轉染MCF7細胞，利用MTS方法評價其對于腫瘤細胞增殖的抑制作用，流式細胞儀分析細胞周期。
　　 結果：
　　 1.當N/P比值大于等于10時，HPD與pDNA具有較好的結合能力。
　　 2.當N/P比值為12時，HPD和pEGFP-C1質粒復合

3、物轉染MCF7、973和JF305的效率分別為32.4％、28.3％和15.1％，高于其他N/P值時的轉染效率。在乳腺癌細胞MCF7中，HPD載體的轉染效率高于Lipo2K；對肺腺癌細胞973，二者轉染效率相近；對胰腺癌細胞JF305，Lipo2K的轉染效率高于HPD。
　　 3.當N/P比值為12時，MCF7、973、JF305三種細胞的相對增殖率分別為86.8％、89.2％、89.7％，毒性級別為1級，載體對細胞無毒性。

4、r>　　 4.在MCF7細胞中，利用HPD進行RNA轉染，效率低于Lipo2K。
　　 5.成功構建了pEGFP-C1-p53重組質粒，western blot鑒定有外源性p53的表達。
　　 6.HPD/pEGFP-C1-p53復合物對于MCF7細胞增殖的抑制作用高于Lipo2K/pEGFP-C1-p53組，p53能夠通過細胞周期阻滯抑制MCF7的增殖。
　　 結論：HPD作為新型納米載體，細胞毒性較低。對于