PLGA納米微球的制備及其作為基因藥物遞送載體的研究.pdf

1、聚乳酸.羥基乙酸共聚物(poly(lactic-co-glycolic acid),PLGA)具有良好的生物相容性、安全性和靶向性修飾等優(yōu)點(diǎn),制備成納米微球后,隨著其在體內(nèi)的逐漸降解,可以釋放出其中包載的藥物,實(shí)現(xiàn)緩慢釋藥,達(dá)到長(zhǎng)效給藥的目的,是一種良好的藥物遞送載體。白喉毒素(diphtheria toxin,DT)及其突變體(DT389)對(duì)多種腫瘤細(xì)胞具有殺傷作用,可以用于治療腫瘤。微球制備過(guò)程中的諸多因素對(duì)微球的性質(zhì)有顯著影響,從

2、而進(jìn)一步影響微球中藥物的釋放特性。本課題旨在研究PLGA納米微球的制備工藝對(duì)微球藥物釋放行為的影響以及該納米微球在腫瘤基因治療中應(yīng)用的可能。
　　 本論文通過(guò)W/O/W乳化溶劑揮發(fā)法制備PLGA納米微球,改變微球的制備參數(shù),包括PLGA組成的單體比例、濃度以及超聲時(shí)間來(lái)制備包載DNA的納米微球。觀察微球表面形態(tài),測(cè)定微球包封率及體外釋放特性,考察微球?qū)λd的DNA的酶切保護(hù)作用。為進(jìn)一步探討PLGA作為基因藥物遞送載體的應(yīng)用,

3、MTT法檢測(cè)空白納米微球?qū)θ四X膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251、人胚腎細(xì)胞HEK293及人肝癌細(xì)胞HepG2的毒性。在以上實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上,構(gòu)建了pcDNA3.1(-)/DT389質(zhì)粒,體外檢測(cè)不同制備條件的PLGA/DT389納米微球?qū)θ四X膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251及人肝癌細(xì)胞HepG2的作用。
　　 掃描電鏡圖片顯示出通過(guò)乳化溶劑揮發(fā)法制備的微球形態(tài)完整,表面光滑無(wú)破損。微球包封率隨超聲時(shí)間的延長(zhǎng)和PLGA濃度的增加而增加,PLGA單體比例的改變對(duì)微

4、球包封率沒(méi)有影響。體外釋放曲線結(jié)果表明,微球突釋現(xiàn)象隨超聲時(shí)間的延長(zhǎng)、PLGA濃度的增加以及PLGA親水性的降低而降低,各種微球均能夠在21d內(nèi)持續(xù)釋放其中包載的DNA。酶切保護(hù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明PLGA納米微球能夠有效保護(hù)DNA,免遭核酸酶的降解。
　　 為了測(cè)定PLGA微球的細(xì)胞毒性及其作為基因藥物遞送載體的性能,我們選取了三種細(xì)胞系,進(jìn)行了MTT檢測(cè)。MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,空白PLGA納米微球?qū)θ四X膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251、人胚腎細(xì)胞H