抗人血管性血友病因子單克隆抗體的制備和應(yīng)用研究.pdf

1、1975年,Boneu等首先把測(cè)定血漿中vWF的水平作為血管性疾病中內(nèi)皮損傷的指標(biāo),因此該單抗的研制將對(duì)相關(guān)疾病的的診斷分析提供有用的工具.我們用Ⅷ濃縮物經(jīng)Sepharose 4B凝膠柱提純的vWF作為免疫原,經(jīng)雜交瘤技術(shù)獲得了一株抗人血管性血友病因子單克隆抗體,暫命名為4E10.瓊脂糖雙擴(kuò)散鑒定為IgG1類,ELISA法測(cè)定其腹水效價(jià)為5×10<'-5>.能與血將中vWF蛋白特異結(jié)合,間接免疫熒光法顯示與人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞反應(yīng)呈特有的顆

2、粒型熒光.流式細(xì)胞儀及免疫組化法測(cè)定表明McAb4E10與人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞反應(yīng)呈陽(yáng)性,與外周血紅細(xì)胞、白細(xì)胞、靜止的血小板不反應(yīng),而與其它組織細(xì)胞沒有反應(yīng).還原條件下證實(shí)McAb4E10和SZ-29都能識(shí)別相對(duì)分子量為225kD和180kD左右的單鏈蛋白多肽.上述結(jié)果說明McAb4E10是識(shí)別vWF特異性的單克隆抗體,在McAb4E10與SZ-29、SZ-34進(jìn)行比較時(shí)我們發(fā)現(xiàn),McAb4E10和SZ-29、SZ-34不競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合vWF蛋

3、白,且<'125>I標(biāo)記單克隆抗體4E10與SZ-29能識(shí)別相同的抗原vWF,可利用雙抗體夾心法檢測(cè)vWF抗原量.因此作者通過檢測(cè)vWF和P-選擇素的表達(dá)初步建立了急性相炎癥反應(yīng)的模型.vWF上的各個(gè)結(jié)構(gòu)域具備各自的結(jié)合活性,從而保證了vWF正常的生理功能,其作為凝血因子Ⅷ載體的結(jié)合部位在D<'′>-D3區(qū),與血小板膜糖蛋白GPIb和GPⅡbⅢa的結(jié)合部位分別在A1區(qū)和RGDS區(qū),而與膠原結(jié)合位點(diǎn)在A1區(qū)和A3區(qū).我們通過血小板聚集試驗(yàn)