結(jié)腸炎癌變過程中MUC1粘蛋白的變化及蘋果多糖對MUC1的影響.pdf

1、研究目的：MUC1粘蛋白是一種高分子量、高糖基化的跨膜蛋白，在腫瘤組織中異常的高表達(dá)，并且與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移過程密切相關(guān)。MUC1作為重要的腫瘤生物學(xué)標(biāo)志物，已成為腫瘤靶向治療的研究熱點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)擬從蘋果渣中提取蘋果多糖，以結(jié)腸癌細(xì)胞系 SW-1116，HT-29以及小鼠結(jié)腸炎相關(guān)的結(jié)腸癌變模型為基礎(chǔ)，觀察蘋果多糖對MUC1的影響及防治結(jié)腸炎癌變的作用，研究MUC1在結(jié)腸炎癌變過程中的變化，為其作為防治結(jié)腸炎癌變潛在的治療靶點(diǎn)提供理

2、論依據(jù)。
　　研究方法：以蘋果果渣為原料，采用水提醇沉、酸堿降解、透析和除蛋白法提取蘋果多糖（AP）；以DMEM培養(yǎng)液培養(yǎng)人結(jié)腸癌細(xì)胞株SW-1116，HT-29，分別給予0.5mg/mL、1mg/mL蘋果多糖培養(yǎng)24、48h，收集細(xì)胞，提取蛋白，用Western-blot方法檢測MUC1蛋白水平變化；采用致癌劑氧化偶氮甲烷（AOM）與致炎劑右旋葡聚糖苷鈉（DSS）聯(lián)合應(yīng)用復(fù)制小鼠結(jié)腸炎相關(guān)的結(jié)腸癌模型。將150只五周齡雄性ICR

3、小鼠，隨機(jī)分為5組：正常對照組、模型組、3個(gè)給藥組，每組30只。實(shí)驗(yàn)開始時(shí)正常對照組小鼠腹腔注射生理鹽水，其余各組小鼠腹腔注射10mg/kg的氧化偶氮甲烷AOM。一周后，飲水中添加2.5%（W/V）右旋葡聚糖苷鈉（DSS）飲水一周，間隔兩周后，再次飲用2.5%（W/V）DSS水溶液一周。第七周時(shí)，在給藥組小鼠飼料中加入含1.25%、2.5%、5%的蘋果多糖，喂養(yǎng)小鼠至實(shí)驗(yàn)結(jié)束。在實(shí)驗(yàn)過程的第3,6,9,15,20周從正常和模型組及治療組

4、中隨機(jī)選取處死小鼠，其余各組小鼠均在實(shí)驗(yàn)結(jié)束的第20周處死，收集小鼠腸道樣本，用于HE染色、免疫組化及Western-blot方法檢測，觀察MUC1的變化及蘋果多糖的作用。
　　研究結(jié)果：通過對蘋果多糖的提取純化，得到糖含量在87.3%和分子量為50000-100000Da均一的蘋果多糖；在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中，人結(jié)腸癌系SW-1116，HT-29細(xì)胞在給予蘋果多糖后，MUC1粘蛋白的表達(dá)在24h、48h均表現(xiàn)為降低趨勢，且48h后的MUC

5、1粘蛋白表達(dá)明顯低于對照組（P＜0.05)；AOM/DSS復(fù)制小鼠結(jié)腸炎癌變的模型，病理HE染色顯示：在第20周時(shí)，模型組中全部小鼠腸道發(fā)生結(jié)腸腺癌和/或結(jié)腸腺瘤。給藥組在不同程度上控制了結(jié)腸腫瘤的發(fā)生率，蘋果多糖5%劑量組中明顯減少腫瘤的發(fā)生，表現(xiàn)為蘋果多糖對結(jié)腸炎發(fā)生癌變的防治作用。采用免疫組化、Western-blot方法測定結(jié)腸粘膜組織中MUC1的表達(dá)變化，在炎癥急性期，粘膜組織中MUC1的表達(dá)與對照組比無顯著性差異，而在炎癥持

6、續(xù)階段及腫瘤形成后，MUC1呈現(xiàn)出高表達(dá)（P＜0.01），給藥組小鼠粘膜中MUC1的表達(dá)較模型組比呈現(xiàn)降低的趨勢，而蘋果多糖5%給藥組中小鼠粘膜MUC1的表達(dá)水平較模型組比明顯降低（P＜0.01）。
　　結(jié)論：
　　1.蘋果多糖可有效的防治ICR小鼠實(shí)驗(yàn)性結(jié)腸炎相關(guān)的結(jié)腸癌變的作用。
　　2.MUC1粘蛋白在結(jié)腸炎癥持續(xù)過程中呈現(xiàn)高表達(dá)，在腫瘤形成后其表達(dá)量異常增高，提示MUC1粘蛋白的變化與結(jié)腸炎癌變過程密切相關(guān)。<