Id-1 siRNA增強(qiáng)大腸癌SW480細(xì)胞對5-FU的化療敏感性.pdf

1、背景:大腸癌是世界上第三大常見腫瘤。盡管近年來在外科技術(shù)、化療和放療方面有很大改進(jìn),但是術(shù)后復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移仍然是大腸癌治療的主要難題。因此需要有新的治療策略來進(jìn)一步提高大腸癌患者的預(yù)后。Id-1是HLH轉(zhuǎn)錄岡子家族的一員,它在許多腫瘤中表達(dá)水平增高,而且它的高表達(dá)和治療效果差呈正相關(guān)。
　　 目的:探討Id-1基因在人大腸癌組織中的表達(dá)及臨床意義;研究Id-1siRNA對人大腸癌SW480細(xì)胞藥物敏感性的影響。
　　 方法:

2、
　　 1.采用Real time PCR和Western blot方法檢測56例手術(shù)切除大腸癌及遠(yuǎn)癌腸粘膜組織中Id-1 mRNA和蛋白的表達(dá)。采用免疫組織化學(xué)方法檢測107例手術(shù)切除大腸癌組織及23例腸鏡下活檢非癌大腸粘膜上皮組織中Id-1的表達(dá)。結(jié)合大腸癌患者臨床病理特征和術(shù)后隨訪資料分析臨床意義。
　　 2.采用Id-1 silRNA干擾人大腸癌SW480細(xì)胞中Id-1基因的表達(dá)。實(shí)驗(yàn)分為空白對照組(未轉(zhuǎn)染的大腸

3、癌細(xì)胞)、陰性對照組(轉(zhuǎn)染非特異性序列的大腸癌細(xì)胞)和Id-1 siRNA組(轉(zhuǎn)染Id-1 siRNA的大腸癌細(xì)胞)。用Real time PCR檢測Id-1 mRNA表達(dá)變化,Westemblot檢測Id-1蛋白表達(dá)變化。用MTT法觀察單用Id-1 siRNA、單用5-FU,以及Id-1 siRNA聯(lián)合5-FU時(shí)SW480細(xì)胞增殖的變化。進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)中,用一種濃度的5-FU處理各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞,用流式細(xì)胞術(shù)觀察細(xì)胞凋亡的變化。用小劑量的5

4、-FU處理各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞,用劃痕愈合實(shí)驗(yàn)觀察各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞體外遷徙運(yùn)動(dòng)能力的變化。
　　 結(jié)果:癌1.在56例新鮮標(biāo)本中,Real time PCR和Western blot結(jié)果顯示:大腸癌組織中Id-1 mRNA和Id-1蛋白的平均表達(dá)水平明顯高于遠(yuǎn)癌腸粘膜組織(P＜0.01)。Id-1 mRNA和蛋白的表達(dá)水平與大腸癌的Dukes分期、腫瘤組織分化程度以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P＜0.05)。免疫組化結(jié)果顯示:大腸癌組織中Id-1蛋白

5、的表達(dá)明顯高于非癌大腸粘膜上皮組織(P＜0.01);Id-1蛋白的表達(dá)水平與大腸癌的Dukes分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P＜0.05)。生存分析顯示,在107例大腸癌患者中,Id-1蛋白高表達(dá)組5年累積生存率明顯低于低表達(dá)組(P＜0.05)。癌2.Id-1 siR-NA成功高效轉(zhuǎn)入大腸癌SW480細(xì)胞內(nèi)。Real time PCR檢測Id-1 mRNA表達(dá)水平在Id-1 siRNA組減低,而在空白對照組,陰性對照組Id-1 mRNA的表達(dá)無

6、明顯變化;Western blot檢測Id-1siRNA組Id-1蛋白表達(dá)較空白對照組和陰性對照組明顯減低(P＜0.01)。MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:單用Id-1 siRNA對SW480細(xì)胞生長有一定抑制作用,但抑制作用較弱;單用化療藥物5-FU對細(xì)胞生長有一定抑制作用,而且這種抑制作用具有明顯的濃度依賴性;Id-1 siRNA和5-FU聯(lián)用時(shí)對SW480細(xì)胞生長的抑制作用顯著增強(qiáng)(P＜0.01),Id-1 siRNA組細(xì)胞對5-FU的易感濃

7、度降低,半數(shù)抑制濃度(IC50)明顯下調(diào)(P＜0.01)。用一種濃度的5-FU處理各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞,流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果表明細(xì)胞凋亡率在Id-1 siRNA組明顯高于空白對照組和陰性對照組(P＜0.01)。用小劑量的5-FU處理各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞,劃痕愈合實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明細(xì)胞遷徙運(yùn)動(dòng)能力在Id-1 siRNA組明顯低于空白對照組和陰性對照組(P＜0.01)。
　　 結(jié)論:
　　 1.Id-1的高表達(dá)不僅與大腸癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān),而且可作