過(guò)表達(dá)TRIM11對(duì)結(jié)直腸癌DLD-1細(xì)胞5-FU敏感性的影響.pdf

1、目的：
　　初步探究TRIM11在結(jié)直腸癌組織或細(xì)胞內(nèi)表達(dá)情況，及其對(duì)5-FU敏感性的影響。
　　方法：
　　1.收集結(jié)直腸癌患者術(shù)后新鮮癌組織及其對(duì)應(yīng)癌旁正常組織標(biāo)本，選用qRT-PCR（熒光定量PCR）檢測(cè)TRIM11mRNA的表達(dá)量。
　　2.分別培養(yǎng)11種結(jié)直腸癌細(xì)胞株，選用qRT-PCR檢測(cè)各腫瘤細(xì)胞內(nèi)TRIM11mRNA的表達(dá)量。
　　3.構(gòu)建 pSin-TRIM11質(zhì)粒載體，利用慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)技術(shù)

2、轉(zhuǎn)染結(jié)直腸癌細(xì)胞DLD-1，構(gòu)建過(guò)表達(dá) TRIM11細(xì)胞系（即DLD-1-TRIM11組），轉(zhuǎn)染pSin/neo為空白質(zhì)粒對(duì)照組（即DLD-1-vector組），最后通過(guò) western blot鑒定DLD-1-TRIM11組TRIM11蛋白被成功過(guò)表達(dá)。
　　4. DLD-1-TRIM11組和DLD-1-vector組分別加入不同濃度5-FU處理24h后，行CCK-8檢測(cè)細(xì)胞活力。
　　5.150ug/ml的5-FU分別作

3、用兩組細(xì)胞24h后，行流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡率。
　　6.利用生物信息學(xué)軟件TargetScan對(duì)TRIM11調(diào)控的miRNAs進(jìn)行預(yù)測(cè)。
　　結(jié)果：
　　1.組織qRT-PCR顯示：7例組織標(biāo)本中，有5例TRIM11mRNA表達(dá)量在結(jié)直腸癌組織中顯著低于其對(duì)應(yīng)癌旁正常組織（P<0.05）。
　　2.細(xì)胞qRT-PCR顯示:在11種結(jié)直腸癌細(xì)胞株中，TRIM11mRNA表達(dá)量各不相同，其中HT29表達(dá)量最高，而D

4、LD-1表達(dá)量最低。
　　3.與DLD-1-vector組比較，TRIM11蛋白水平在DLD-1-TRIM11組細(xì)胞中顯著性提高（P<0.05）。
　　4.CCK-8結(jié)果顯示：DLD-1-TRIM11組細(xì)胞活力顯著低于 DLD-1-vector組（P<0.05），DLD-1-TRIM11組半數(shù)抑制率（IC50=13.94ug/ml）明顯低于DLD-1-vector組（IC50=110.24 ug/ml）。
　　5.流式

5、細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示：DLD-1-TRIM11組細(xì)胞凋亡率明顯高于DLD-1-vector組（P<0.05）。
　　6.TargetScan軟件預(yù)測(cè)：miR-9也許能靶向調(diào)控TRIM11。
　　結(jié)論：
　　1.利用慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)技術(shù)轉(zhuǎn)染結(jié)直腸癌細(xì)胞DLD-1，pSin-TRIM11質(zhì)粒載體能顯著性提高TRIM11的蛋白表達(dá)。
　　2.在結(jié)直腸癌細(xì)胞 DLD-1中過(guò)表達(dá) TRIM11時(shí)，可能提高 DLD-1細(xì)胞對(duì)5-FU的敏