SPARC調(diào)節(jié)糖酵解影響肝癌細胞對5-FU敏感性的研究.pdf

1、目的：探討肝細胞癌中SPARC對糖酵解的調(diào)節(jié)作用及其分子機制，為SPARC作用于5-Fu耐藥的肝癌細胞，使耐藥肝癌細胞對5-Fu重新敏感的臨床應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)及實驗依據(jù)。
　　方法：本研究選取HepG2,Hep3B,Huh7三株肝癌細胞，轉(zhuǎn)染SPARC或siRNA SPARC后,應(yīng)用比色法分別檢測轉(zhuǎn)染后的三株肝癌細胞中葡萄糖攝取量以及乳酸生成量以及糖酵解轉(zhuǎn)運蛋白Glut1和關(guān)鍵酶HKⅡ、LDHA的活性變化；應(yīng)用低濃度逐漸遞增的5-

2、FU誘導(dǎo)生成耐藥HepG2細胞；Western blotting法檢測缺糖條件下SPARC、AMPK、Thr-172 AMPK的表達情況，及5-FU耐藥HepG2細胞和敏感細胞中糖酵解代謝關(guān)鍵酶的變化情況；RT-PCR法檢測糖酵解關(guān)鍵基因Glut1、HKⅡ、LDHA的mRNA水平；在耐藥細胞中敲除Glut1、HKⅡ、LDHA的表達，或轉(zhuǎn)染SPARC，或瞬時共轉(zhuǎn)染SPARC與糖酵解關(guān)鍵基因Glut1、HKⅡ、LDHA，分別應(yīng)用臺盼藍拒染法

3、比較處理前后細胞對5-FU敏感性的變化，并應(yīng)用該方法檢測缺糖環(huán)境下SPARC對于HepG2細胞活力的影響。
　　結(jié)果：過表達SPARC的肝癌細胞中葡萄糖攝取及乳酸生成量明顯下降，糖酵解轉(zhuǎn)運蛋白Glut1及關(guān)鍵酶HKⅡ、LDHA的活性下調(diào)，反之，轉(zhuǎn)染siRNA SPARC的肝癌細胞中糖酵解作用上調(diào)；過表達SPARC的HepG2細胞在缺糖條件下細胞活力下調(diào)幅度較對照組減少，同時AMPK、Thr-172 AMPK的表達上調(diào)；5-FU耐藥

4、肝癌細胞中糖酵解關(guān)鍵基因Glut1、HKⅡ、LDHA的mRNA水平及蛋白水平上調(diào)；5-FU作用于過表達SPARC的HepG2細胞時，細胞活力較對照組明顯下降；耐藥HepG2細胞中SPARC過表達時，細胞對5-FU的敏感性提高，當瞬時共轉(zhuǎn)染SPARC與糖酵解關(guān)鍵基因時，細胞對5-FU不再重新獲敏。
　　結(jié)論：肝細胞癌中，SPARC通過下調(diào)糖酵解的葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白Glut1及關(guān)鍵酶HKⅡ、LDHA負性調(diào)控糖酵解作用；SPARC能夠促使肝