2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:探討肝細胞癌中SPARC對糖酵解的調(diào)節(jié)作用及其分子機制,為SPARC作用于5-Fu耐藥的肝癌細胞,使耐藥肝癌細胞對5-Fu重新敏感的臨床應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)及實驗依據(jù)。
  方法:本研究選取HepG2,Hep3B,Huh7三株肝癌細胞,轉(zhuǎn)染SPARC或siRNA SPARC后,應(yīng)用比色法分別檢測轉(zhuǎn)染后的三株肝癌細胞中葡萄糖攝取量以及乳酸生成量以及糖酵解轉(zhuǎn)運蛋白Glut1和關(guān)鍵酶HKⅡ、LDHA的活性變化;應(yīng)用低濃度逐漸遞增的5-

2、FU誘導(dǎo)生成耐藥HepG2細胞;Western blotting法檢測缺糖條件下SPARC、AMPK、Thr-172 AMPK的表達情況,及5-FU耐藥HepG2細胞和敏感細胞中糖酵解代謝關(guān)鍵酶的變化情況;RT-PCR法檢測糖酵解關(guān)鍵基因Glut1、HKⅡ、LDHA的mRNA水平;在耐藥細胞中敲除Glut1、HKⅡ、LDHA的表達,或轉(zhuǎn)染SPARC,或瞬時共轉(zhuǎn)染SPARC與糖酵解關(guān)鍵基因Glut1、HKⅡ、LDHA,分別應(yīng)用臺盼藍拒染法

3、比較處理前后細胞對5-FU敏感性的變化,并應(yīng)用該方法檢測缺糖環(huán)境下SPARC對于HepG2細胞活力的影響。
  結(jié)果:過表達SPARC的肝癌細胞中葡萄糖攝取及乳酸生成量明顯下降,糖酵解轉(zhuǎn)運蛋白Glut1及關(guān)鍵酶HKⅡ、LDHA的活性下調(diào),反之,轉(zhuǎn)染siRNA SPARC的肝癌細胞中糖酵解作用上調(diào);過表達SPARC的HepG2細胞在缺糖條件下細胞活力下調(diào)幅度較對照組減少,同時AMPK、Thr-172 AMPK的表達上調(diào);5-FU耐藥

4、肝癌細胞中糖酵解關(guān)鍵基因Glut1、HKⅡ、LDHA的mRNA水平及蛋白水平上調(diào);5-FU作用于過表達SPARC的HepG2細胞時,細胞活力較對照組明顯下降;耐藥HepG2細胞中SPARC過表達時,細胞對5-FU的敏感性提高,當瞬時共轉(zhuǎn)染SPARC與糖酵解關(guān)鍵基因時,細胞對5-FU不再重新獲敏。
  結(jié)論:肝細胞癌中,SPARC通過下調(diào)糖酵解的葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白Glut1及關(guān)鍵酶HKⅡ、LDHA負性調(diào)控糖酵解作用;SPARC能夠促使肝

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