A型流感病毒核蛋白基因的克隆與表達(dá).pdf

1、鄭州大學(xué)碩士學(xué)位論文A型流感病毒核蛋白基因的克隆與表達(dá)姓名：馬一君申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：免疫學(xué)指導(dǎo)教師：杜獻(xiàn)堂20050510鄭州大學(xué)2 0 0 5 屆碩士研究生學(xué)位論文 A 型流感病毒核蛋白基因的克隆與表達(dá)篩選出轉(zhuǎn)化細(xì)菌的陽(yáng)性菌落，用P C R 擴(kuò)增及酶切鑒定等方法對(duì)陽(yáng)性菌落進(jìn)行鑒定并測(cè)序，測(cè)序結(jié)果與G e n B a n k 中公布的已知A 型流感病毒N P 基因序列進(jìn)行比較分析；將重組質(zhì)粒p G E M —TE a s y -

2、N P 和原核表達(dá)質(zhì)粒p G E X 一4 T —l 同時(shí)酶切，膠回收純化后將目的基因定向插入表達(dá)質(zhì)粒，轉(zhuǎn)化大腸桿菌B L 2 1 ，用P C R 擴(kuò)增等方法篩選出陽(yáng)性克隆并測(cè)序：將含重組表達(dá)質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化菌經(jīng)I P T G 誘導(dǎo)目的蛋白表達(dá)，經(jīng)1 2 ％S D S —P A G E 凝膠電泳分析蛋白表達(dá)情況，同時(shí)用W e s t e r n b l o t 檢測(cè)表達(dá)產(chǎn)物。結(jié)聚I 。藏動(dòng)梅建Tp G E M - TE a s y - N P

3、 重組屢糠和p G E X - 4 T 一1 - - N P 愿孩襲達(dá)重組膜粒。2 ．測(cè)序結(jié)果表明，流感病毒株A ／s w i n e ／H e n a n ／7 0 3 ／2 0 0 1 ( H 3 N 2 ) 的N P 基I 羽序列全長(zhǎng)1 4 9 4 b p ，縭器壺4 9 8 令氨蒸酸殘基綴或的蠶囪震。剝翅B L A S T 對(duì)本實(shí)驗(yàn)菠躅流艨病毒株的N P 基因序列與G e n B a n k 公布的A 嬲流感病簿株N P 基因片

4、段讖行同源憋分板，續(xù)暴表明竣營(yíng)酸黟列敕同源矬戈9 9 ％，其綴鼴產(chǎn)物懿箋基酸黟列同源性為9 9 ％。測(cè)序結(jié)果再次誠(chéng)實(shí)了流感病毒核鬣白基因的高度保守性。3 。S D S —P A G E 電泳分凝續(xù)票表驥，舍I 撼E X - 4 T —l 一躲震?？ L 2 1 纓蕊經(jīng)I P T G 誘導(dǎo)后能夠表達(dá)出目的融合蛋白G S T —N P ，分子量約8 2 K D ，結(jié)果與預(yù)期一致。4 ．W e s t e r nb l o t 撿溯結(jié)累表明