凝血酶通過(guò)下調(diào)PTEN表達(dá)促進(jìn)肺癌細(xì)胞生長(zhǎng)轉(zhuǎn)移機(jī)制研究.pdf

1、凝血酶(Thrombin)在止血與血栓形成、炎癥反應(yīng)、胚胎發(fā)生、血管形成等生理及病理過(guò)程中發(fā)揮著重要作用。同時(shí)也是腫瘤發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的重要因子。本實(shí)驗(yàn)室前期的研究結(jié)果顯示,凝血酶可以促進(jìn)肺癌細(xì)胞移植瘤裸鼠的腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移,縮短荷瘤裸鼠的生存期,發(fā)現(xiàn)凝血酶可明顯下調(diào)抑癌基因第10號(hào)染色體上缺失的與張力蛋白同源的磷酸酶(phosphatase and tensin homologue deleted on chromosome10,PTEN

2、)的表達(dá)。PTEN基因是一個(gè)具有雙特異磷酸酶活性(蛋白磷酸酶和脂質(zhì)磷酸酶)的抑癌基因,可以促進(jìn)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、侵襲、轉(zhuǎn)移等。本研究主要探討了PTEN調(diào)控的凝血酶體外促進(jìn)肺癌細(xì)胞Glc-82生長(zhǎng)轉(zhuǎn)移機(jī)制。
　　為證明凝血酶在體外促進(jìn)肺癌細(xì)胞Glc-82增殖、細(xì)胞周期進(jìn)程、抑制細(xì)胞凋亡及可能的作用機(jī)制。我們采用細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒(Cell Counting Kit-8,CCK-8)法檢測(cè)凝血酶對(duì) Glc-82細(xì)胞增殖活性的影響,確定其量

3、效和時(shí)效關(guān)系;利用碘化丙錠(propidium iodide, PI)單染和AnnexinV-APC/PI雙染用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期和凋亡;以熒光實(shí)時(shí)定量 PCR檢測(cè)PTEN mRNA水平的變化,免疫印記法檢測(cè)PTEN、Skp2、p27kip1、p21WAF1表達(dá)和AKT磷酸化水平的變化。結(jié)果表明凝血酶(0.5U/ml和1.0U/ml)可以有效促進(jìn)細(xì)胞的增殖(p<0.01),抑制細(xì)胞凋亡。凝血酶(0.5U/ml)可以促進(jìn)Glc-82細(xì)

4、胞由G1期向S期轉(zhuǎn)化,抑制PTEN、p27kip1、p21WAF1的表達(dá)水平,提高Skp2的表達(dá)水平,提高AKT磷酸化水平。
　　凝血酶可以促進(jìn)肺癌細(xì)胞Glc-82周期進(jìn)程,促進(jìn)細(xì)胞增殖,抑制細(xì)胞凋亡。為了進(jìn)一步證實(shí) PTEN是否參與調(diào)控凝血酶體外促進(jìn)肺癌細(xì)胞Glc-82生長(zhǎng)轉(zhuǎn)移機(jī)制。我們觀察了凝血酶對(duì)PTEN-shRNA干涉后Glc-82細(xì)胞周期、凋亡、遷移的影響及可能的作用機(jī)制。研究結(jié)果表明PTEN參與了凝血酶促進(jìn)Glc-82