豬圓環(huán)病毒2型吉林地方株ORF2基因的克隆、測序及原核表達(dá).pdf

1、本研究根據(jù)GenBank中發(fā)表的PCV2ORF2基因序列，設(shè)計(jì)合成一對(duì)特異性引物，用PCR方法從接種經(jīng)過鑒定的PCV2吉林株(JL01)PK-15細(xì)胞中，擴(kuò)增出PCV2JL01毒株的ORF2基因。將擴(kuò)增片段克隆于pMD-18T載體，進(jìn)行序列測定。結(jié)果表明，PCV2JL01毒株的ORF2基因核苷酸長度為702bp。利用分子生物學(xué)軟件對(duì)PCV2JL01株ORF2基因與GenBank中發(fā)表的國內(nèi)外其他參考毒株ORF2基因進(jìn)行核苷酸序列同源性比

2、較。結(jié)果表明：PCV2JL01株ORF2基因的核苷酸序列與國內(nèi)不同毒株間的同源性較高，而與國外毒株間該基因核苷酸的同源性相對(duì)較低，這可能是不同地區(qū)病毒在與宿主相互作用過程中適應(yīng)宿主免疫反應(yīng)的進(jìn)化結(jié)果。 根據(jù)基因分析，設(shè)計(jì)一對(duì)引物，從克隆的pMD-ORF2重組質(zhì)粒擴(kuò)增出大小為585bp的部分ORF2基因片段(ORFs)，克隆到pMD-18T載體中，之后轉(zhuǎn)入表達(dá)載體pET-32a，經(jīng)SalI和XhoI酶切鑒定，得到陽性重組表達(dá)質(zhì)粒p