豬圓環(huán)病毒ORF2基因和細(xì)小病毒VP2基因真核表達(dá)載體的構(gòu)建及鑒定.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、河北農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文豬圓環(huán)病毒F2基因和細(xì)小病毒VP2基因真核表達(dá)載體的構(gòu)建及鑒定姓名：康亞男申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：預(yù)防獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師：楊潤德20090606ConstructionIdentificationtheEukaryoticExpressionVectofPcineCircovirusType2F2GenePcineParvovirusVP2GeneAuth:KangYananSupervis:Prof.YangRun

2、deSpecialty:PreventiveVeterinaryMedicineAbstractPcineCircovirusType2istheprimarycausativeagentofPostweaningmultisystemicwastingsyndromeSowabtionmtalitysyndromePcinedermatitisnephropathysyndromesoon.PCV2couldproducelesion

3、ofimmunefunction.Becausetheimmunefunctionwkirregularprostrationthebodycouldbeinfectwithsomuchbacteriumviruscausingapotentialeconomicalimpactontheswineindustrywldwide.PcineParvovirusisthemainpathogenyofSowabtionmtalitysyn

4、drome.Itpossiblecauseabtionstillbirthmummification.TodayPCV2PPVcoinfectionalloverthewldwemusttobefacedwiththedraconicchallenge.ThePCV2PPVweretreatedinoculatedintoPK15cell.TheDNAencodingfulllengthPCV2PPVwereextractedusing

5、proleaseK.TwopairsofPCRprimersweredesignedaccdingtothesequenceofthePCV2PPV7909strain.TheDNAencodingF2VP2wereclonedintopCDNA3.1()toconstructthreerecombinantplasscontainingF2geneVP2geneF2VP2genewerecalledpCDNA3.1F2、pCDNA3.

6、1VP2pCDNA3.1F2VP2.Threerecombinantplasswerefurtheranalyzedwithrestrictionenzyme.TheresultisobjectivefragmentswereedintothepCDNA3.1()crectly.Weextractedsomanyrecombinantplassbythealkalinelysispolyethyleneglycolprecipitati

7、onmethod.AnalyzeconcentrationpuritycoefficientbydetectingtheOpticalDensityoftherecombinantplass.Theconsequenceisthattheyweregooddonothaveproteinpollution.HealthymousewereimmunizedwiththreerecombinantDNAafterpredisposaltr

8、eatmentwithProcaine.Injected0.2mgrecombinantDNAbyintramusculartwoweekslaterIMagaintillthreetimes.Wecollectthebloodserumthroughremovalingtheirglobesatsecondaryimmunizationthirdtimeweeklater.ThenweestablishedindireetELISAm

9、ethodfdetecttingtheassaystheresultshowsthatthemouseproducetheantibidiestoPCV2PPVthroughIMthreerecombinantplass.Comparedthesecondaryimmunizationwiththirdtimeslatterhadtheconspicuoushigherantibodylevel.Invitrostudycellstha

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