Lapatinib體外逆轉P-糖蛋白介導的急性白血病細胞多藥耐藥.pdf

1、目的：觀察lapatinib能否體外逆轉P—糖蛋白介導的白血病MDR，探討lapatinib逆轉的可能機制，為開發(fā)新的急性白血病P—gp逆轉劑打下基礎。 方法：流式細胞儀檢測多藥耐藥K562/ADR細胞株及急性白血病患者細胞表面P—gp表達，細胞毒性實驗（MTT法）觀察傳統(tǒng)化療藥物阿霉素、柔紅霉素聯(lián)合lapatinib后多藥耐藥K562/ADR細胞株及原代急性白血病細胞IC50值的變化，流式細胞儀觀察lapatinib對阿霉素和

2、羅丹明123積累以及羅丹明123流出的影響，RT—PCR和western—blot法分別在mRNA水平和蛋白質水平觀察lapatinib對P—gp表達的影響，Western—blot法觀察lapatinib對細胞ERK1/2和AKT磷酸化的影響。 結果：⑴Lapatinib體外逆轉P—gp介導的MDR: MTT結果顯示：0.625，1.25，2.5μM的lapatinib與阿霉素（DOX）聯(lián)合使用時的MDR細胞K562/ADR半

3、數抑制濃度（IC50）值分別為4.182、2.826、1.644μM，分別低于無逆轉劑組8.908μM（P<0.01），與柔紅霉素（DNR）聯(lián)合使用的IC50值分別為1.628、0.746和0.269μM，也低于無逆轉劑組2.740μM（P<0.01），而且lapatinib這種逆轉作用呈濃度依賴性，2.5μM的lapatinib對DOX和DNR的逆轉倍數分別達到5.4倍和10.2倍（P<0.01）。表明Lapatinib能明顯增加阿霉

4、素、柔紅霉素對K562/ADR細胞的毒性。另Lapatinib不會增加藥物對敏感株的毒性；Lapatinib不會增加非P—gp底物順鉑對白血病細胞的毒性；Lapatinib這種逆轉活性呈濃度依賴性。⑵Lapatinib對阿霉素和羅丹明123積累的影響結果顯示：與對照組比較，lapatinib可以濃度依賴性顯著增加阿霉素和羅丹明123在K562/ADR細胞內的積累（P＜0.05），卻不能增加在敏感細胞株K562的積累，同時lapatini

5、b能明顯抑制羅丹明123從K562/ADR內輸出（P＜0.05）。⑶Lapatinib對P-gp表達的影響RT-PCR和western-blot的結果顯示：在mRNA和蛋白質水平lapatinib并沒有影響P-gp在K562/ADR的表達。⑷Lapatinib對白血病細胞ERK1/2和AKT磷酸化的影響western-blot結果證實lapatinib不影響細胞內AKT和ERK1/2的磷酸化水平。⑸Lapatinib在體外對原代急性白血

6、病MDR細胞的逆轉和對羅丹明123積累的影響結果顯示：與對照組比較，Lapatinib可以顯著提高過表達P-gp的原代急性白血病細胞對阿霉素、柔紅霉素的敏感性（P＜0.05），lapatinib呈濃度依賴性增加羅丹明123在過表達P-gp的原代白血病細胞的積累。 結論：①Lapatinib能明顯增加阿霉素、柔紅霉素對K562/ADR細胞的毒性，Lapatinib可以逆轉P-糖蛋白介導的MDR。②Lapatinib增強阿霉素、柔紅