抑制P-糖蛋白表達(dá)逆轉(zhuǎn)胰腺癌多藥耐藥.pdf

1、目的:研究黃芪(Astragalus,AST)對人胰腺癌細(xì)胞株P(guān)ANC-1中的P-糖蛋白的抑制作用和逆轉(zhuǎn)其耐藥性的效果。
　　 方法:選用人胰腺癌耐藥細(xì)胞株P(guān)ANC-1,通過MTT法和免疫組織化學(xué)等方法,評價(jià)黃芪對P-糖蛋白(P-gp)介導(dǎo)的耐藥機(jī)制的逆轉(zhuǎn)作用。采用MTT法測定不同濃度的黃芪,5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-Fu)及黃芪和5-Fu聯(lián)合用藥的情況下對胰腺癌細(xì)胞增殖作用的抑制效果,用免疫組織化學(xué)的方法

2、檢測使用不同濃度的黃芪,5-氟尿嘧啶的情況下對P-糖蛋白表達(dá)的影響。
　　 結(jié)果:由MTT法檢測AST和5-Fu對PANC-1細(xì)胞單獨(dú)抑制情況結(jié)果可見,兩種藥物與各自對應(yīng)的對照組相比,均能明顯抑制胰腺癌PANC-1細(xì)胞的增殖,同一藥物不同濃度組間均數(shù)的兩兩比較結(jié)果顯示:AST隨其濃度的增高,對PANC-1細(xì)胞的抑制變化無明顯差異,而5-Fu隨其濃度的增加出現(xiàn)抑制性增強(qiáng),提示5-Fu對PANC-1細(xì)胞的增殖抑制作用在一定范圍內(nèi)具有

3、濃度依賴性。由5-Fu單獨(dú)作用于PANC-1細(xì)胞的增殖抑制作用結(jié)果可見,5-Fu對PANC-1細(xì)胞增殖抑制率達(dá)15—30％時(shí)的藥物濃度為0.5ug/ml和5ug/ml,為減少藥物濃度過大時(shí)可能產(chǎn)生的藥物毒性作用,我們選擇0.5ug/ml作為與不同濃度的AST聯(lián)合用藥時(shí)的最終濃度。由AST與5-Fu聯(lián)合用藥對胰腺癌PANC-1細(xì)胞的抑制作用結(jié)果可見,不同濃度AST聯(lián)合5-Fu(0.5ug/ml)后,對胰腺癌PANC-1細(xì)胞的增殖抑制率明顯

4、升高,接近或大于兩種藥物單獨(dú)用藥抑制率之和,與單獨(dú)5-Fu或相應(yīng)濃度AST組比較,差異有顯著性,表明聯(lián)合用藥可顯著提高單獨(dú)用藥對胰腺癌PANC-1細(xì)胞的增殖抑制作用。聯(lián)合效應(yīng)分析結(jié)果顯示,2.5mg/ml、5mg/ml的AST與5-Fu的聯(lián)合效應(yīng)為相加效應(yīng),10mg/ml、20mg/ml的AST與5-Fu的聯(lián)合效應(yīng)為協(xié)同效應(yīng)。由各組實(shí)驗(yàn)Akt與Mdr-1蛋白表達(dá)免疫細(xì)胞化學(xué)染色結(jié)果可見,Mdr-1、Akt在PANC-1細(xì)胞中的陽性表達(dá)均

5、呈棕色反應(yīng)。與Akt對照組相比,分別加入AST和5-Fu作用24h后,胞質(zhì)的棕色顆粒都出現(xiàn)明顯減少,其中5-Fu組比AST組作用下棕色著色顆粒多,AST在20mg/ml的濃度下顏色變化比5mg/ml更為明顯,表明藥物作用下,Akt蛋白的表達(dá)量出現(xiàn)明顯降低。IOD值的統(tǒng)計(jì)分析顯示,不同實(shí)驗(yàn)組間與對照組相比Akt蛋白表達(dá)差異具有顯著性,Akt對照組與5-Fu組之間Akt表達(dá)無明顯差異；5mg/mlAST組與20mg/mlAST組之間Akt表

6、達(dá)差異有顯著性。Mdr-1蛋白在不同組間的表達(dá)情況與Akt蛋白變化相似,各實(shí)驗(yàn)組與對照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,Mdr-1對照組與5-Fu組之間Mdr-1表達(dá)無明顯差異；5mg/mlAST組與20mg/mlAST組之間Mdr-1表達(dá)差異有顯著性。
　　 結(jié)論:在胰腺癌細(xì)胞中,P-糖蛋白呈高表達(dá),針對P-糖蛋白,黃芪能有效地抑制P—gp的表達(dá)及功能,從而拮抗P-gp介導(dǎo)的多藥耐藥,顯著提高化療藥物5-Fu對胰腺癌PANC-1細(xì)胞的增