多種策略逆轉(zhuǎn)P-糖蛋白和乳腺癌耐藥蛋白介導(dǎo)的腫瘤多藥耐藥.pdf

1、中山大學(xué)博士學(xué)位論文多種策略逆轉(zhuǎn)P一糖蛋白和乳腺癌耐藥蛋白介導(dǎo)的腫瘤多藥耐藥專業(yè)：博士研究生：導(dǎo)師：腫瘤學(xué)石智符立梧教授答辯委員會(huì)成員(簽名)主席：鼉齜陟委員：200磣Iy石智多種策略逆轉(zhuǎn)P糖蛋白和乳腺癌耐藥蛋白介導(dǎo)的腫瘤多藥耐藥得耐藥性。理論上克服MDR有兩種方法：一、開(kāi)發(fā)對(duì)MDR腫瘤細(xì)胞不具有抗藥性的新抗癌藥物：二、尋找MDR逆轉(zhuǎn)劑與抗癌藥物合用，恢復(fù)MDR腫瘤細(xì)胞對(duì)抗癌藥物的敏感性。盡管現(xiàn)階段現(xiàn)有的眾多MDR逆轉(zhuǎn)劑在體外及動(dòng)物模型

2、中都具有很好的逆轉(zhuǎn)效果，佃是在臨床實(shí)驗(yàn)中，這些逆轉(zhuǎn)劑由于可引起嚴(yán)重的毒副作用、干擾傳統(tǒng)抗癌藥物的藥代動(dòng)力學(xué)等種種原因，都沒(méi)有取得預(yù)期的臨床效果，因此急需開(kāi)發(fā)新的逆轉(zhuǎn)劑來(lái)逆轉(zhuǎn)MDR。近年來(lái)，隨著科學(xué)技術(shù)的迅猛發(fā)展，新的生物技術(shù)如RNA干擾(RNAinterfering，RNAi)的出現(xiàn)，新的天然藥物的分離以及新的化合物的合成，為成功開(kāi)發(fā)MDR逆轉(zhuǎn)劑帶來(lái)了希望。本課題先后采用多種策略來(lái)逆轉(zhuǎn)Pgp和BCRP介導(dǎo)的腫瘤MDR，并取得了較好的結(jié)果

3、。1通過(guò)篩選發(fā)現(xiàn)，經(jīng)PCR合成的MDRIVsiRNA表達(dá)框架的干擾效果在五個(gè)MDRl(IV)siRNA表達(dá)框架中是最好的，然后構(gòu)建含有該表達(dá)框架的質(zhì)粒pEGFPC2一Hl—MDRIshDNA，并將其轉(zhuǎn)染入過(guò)表達(dá)Pgp的MDR腫瘤細(xì)胞KB400，通過(guò)G418篩選得到穩(wěn)定表達(dá)MDRIshRNA的細(xì)胞克隆KBv200／MDRIsh。KB，200／MDRlsh細(xì)胞的MDRl基因的mRNA和P—gp表達(dá)降低超過(guò)900／00，并且持續(xù)穩(wěn)定表達(dá)增強(qiáng)型

4、綠色熒光蛋白和低水平的MDRI基因超過(guò)lO代。與KBv200細(xì)胞相比，KB。200／MDRlsh細(xì)胞相對(duì)敏感株KB細(xì)胞對(duì)長(zhǎng)春新堿的抗藥性從624倍降到lO5倍，對(duì)阿霉素的抗藥性從745倍降到95倍，并且胞內(nèi)的阿霉素積累從O30008nmoles／10％ells增加到086016nmoles／lO％ells，胞內(nèi)的羅丹明123的熒光強(qiáng)度從358163／106cells胞增加到1396307／106cells。在裸鼠移植瘤模型中，長(zhǎng)春新堿(

5、02mg／kg)對(duì)KBv200／MDRIsh細(xì)胞移植瘤的抑瘤率達(dá)到42O％，而對(duì)KB，2∞細(xì)胞移植瘤沒(méi)有抑制作用。這些結(jié)果說(shuō)明在體內(nèi)和體外的模型中采用RNA干擾技術(shù)沉默MDRI基因表達(dá)可以有效的逆轉(zhuǎn)MDR。在探討MDR形成機(jī)理及相應(yīng)的逆轉(zhuǎn)機(jī)制的過(guò)程中，發(fā)現(xiàn)與敏感株細(xì)胞KB和MCF7相比，MDR腫瘤細(xì)胞KB。200和MCF7／Adr不僅過(guò)表達(dá)PgP，而且凋亡抑制蛋白(inhibitorofapoptosisproteins1APs)家族成