p38蛋白激酶對(duì)P-糖蛋白介導(dǎo)的難治性癲癇耐藥的影響.pdf

1、大約30％左右的癲癇患者對(duì)抗癲癇藥(antiepileptic drugs，AEDs)不敏感，出現(xiàn)難以被控制的反復(fù)發(fā)作，稱之為藥物難治性癲癇。多藥轉(zhuǎn)運(yùn)體P-糖蛋白(P-glycoprotein，PGP)介導(dǎo)的難治性癲癇耐藥已被國(guó)內(nèi)外公認(rèn)。因其能識(shí)別多種不同作用機(jī)制的AEDs，主動(dòng)將藥物泵出血腦屏障，引起腦內(nèi)藥物濃度下降，從而導(dǎo)致耐藥。但PGP表達(dá)上調(diào)的分子機(jī)制目前尚未清楚。p38蛋白激酶(p38mitogen-activated pro

2、tein kinase，p38 MAPK)是MAPK家族的最新成員，主要通過(guò)激活一些轉(zhuǎn)錄因子和其它的蛋白酶而產(chǎn)生一定的生物學(xué)效應(yīng)。目前認(rèn)為，p38MAPK信號(hào)通路主要參與應(yīng)激條件下細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)、炎癥反應(yīng)、缺血/再灌注損傷和細(xì)胞凋亡過(guò)程。文獻(xiàn)證實(shí)有許多的因素可以誘導(dǎo)多藥轉(zhuǎn)運(yùn)體PGP表達(dá)，如細(xì)胞毒性藥物、放射線照射、熱休克等應(yīng)激變化。而這些因素恰恰也是激活p38MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的誘因。同時(shí)體外試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)MAPKs信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路參與了腫瘤細(xì)

3、胞的多藥耐藥。以上提示p38 MAPK可能參與了PGP介導(dǎo)的難治性癲癇的耐藥。
　　本課題采用免疫組化、Western-Blot、微透析、高效液相色譜技術(shù)等，在不同標(biāo)本上（整體動(dòng)物，動(dòng)物腦組織），研究p38 MAPK途徑對(duì)PGP表達(dá)及難治性癲癇耐藥的影響。
　　本課題主要包括兩個(gè)部分:
　　第一部分:p38蛋白激酶對(duì)大鼠腦內(nèi)P-糖蛋白表達(dá)和行為學(xué)的影響
　　建立慢性戊四氮點(diǎn)燃癲癇動(dòng)物模型，采用免疫熒光和Weste

4、rn-Blot的方法，在癲癇模型上觀察p38 MAPK拮抗劑對(duì)腦內(nèi)PGP表達(dá)及大鼠行為學(xué)的影響。
　　第二部分:p38蛋白激酶對(duì)癲癇大鼠海馬細(xì)胞外液抗癲癇藥物濃度的影響
　　建立慢性戊四氮點(diǎn)燃癲癇動(dòng)物模型，采用微透析技術(shù)和高效液相色譜技術(shù)，通過(guò)腹腔注射VPA和LTG，觀察在癲癇和正常大鼠海馬細(xì)胞外液AEDs的濃度差異;觀察海馬局部給予p38 MAPK拮抗劑SB202190后，癲癇大鼠海馬細(xì)胞外液中AEDs的濃度變化。

5、　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果
　　第一部分:癲癇組大鼠腦內(nèi)p38MAPK和PGP的表達(dá)顯著高于對(duì)照組(p＜0.01);給予p38 MAPK拮抗劑SB202190后，癲癇大鼠腦內(nèi)p38 MAPK和PGP的表達(dá)明顯下降（p＜0.05），癲癇發(fā)作級(jí)別及次數(shù)明顯下降(p＜0.05)。
　　第二部分:(1)癲癇組與正常組比較，給藥后30-120min VPA濃度均降低(p＜0.05)，而給藥后150min二者無(wú)明顯差異(p＞0.05);SB20219

6、0組與癲癇組比較，給藥后30-120min VPA濃度均升高(p＜0.05)，而給藥后150min二者無(wú)明顯差異(p＞0.05)。(2)癲癇組與正常組比較，給藥后30-90min及150min LTG濃度降低(p＜0.05)，而120min二者無(wú)明顯差異(p＞0.05);SB202190組與癲癇組比較，給藥后各時(shí)間點(diǎn)LTG濃度均升高(p＜0.05)。(3)癲癇組與SB202190組VPA峰濃度出現(xiàn)時(shí)間一致，均為60min，較正常組(30

7、min)后移;(4)癲癇組與SB202190組LTG峰濃度出現(xiàn)時(shí)間一致，均為90min，較正常組(60min)后移。
　　綜上所述，通過(guò)本實(shí)驗(yàn)研究得出以下結(jié)論:
　　1.p38MAPK拮抗劑SB202190可以減少癲癇大鼠腦內(nèi)的PGP表達(dá)，表明p38MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑參與了PGP的表達(dá);阻斷p38 MAPK信號(hào)通路可以降低大鼠點(diǎn)燃后的發(fā)作分級(jí)。
　　2.p38MAPK拮抗劑SB202190可以提高癲癇大鼠海馬細(xì)胞外液